Competent cell preparation

소개

이번 실험에서는 inoculation을 하고 그 결과를 통하여 E.coli(DH5α)의 생장을 확인한다. 또한 형질전환실험에 적합한 E.coli(DH5α)를 사용하여 competent E.coli cell을 제조해보고, 더 나아가 transformation efficiency에 대해서도 알아본다. 이러한 종류를 효과적으로 transformation 하기 위하여 박테리아는 DNA를 받아 들이는 능력을 향상시키는 물리적, 화학적 형태의 처리가 필요하다. E.coli를 포함하여 대부분의 박테리아는 일반적인 환경에서 극히 제한된 양의 DNA만을 도입한다. 효과적으로 transformation하기 위해 박테리아의 DNA를 받아들이는 능력을 향상시키는 물리적, 화학적 형태의 처리가 필요하다. 정상적인 bacteria cell에 이러한 물리적, 화학적 처리를 하여 외부의 DNA가 잘 들어갈 수 있도록 만든 cell을 competent cell이라고 한다. 이러한 competent E.coli cell을 제조할 때에는 E.coli를 log phase까지 배양하고 저온상태를 유지하면서 을 이용하는 방법으로 제조하고, competent cell이 성공적으로 완성되었는지 확인하기 위하여 heat shock을 이용하여 transformation 과정을 진행시킨다. 이번 실험에서 제조하는 competent E.coli cell은 재조합 DNA 형질전환 시에 사용될 cell이므로 급속냉동하여 보관한다.

목차

Abstract:
Introduction:
Materials & Methods:
Result:
Discussion:
Reference:

본문내용

Abstract:
이번 실험에서는 inoculation을 하고 그 결과를 통하여 E.coli(DH5α)의 생장을 확인한다. 또한 형질전환실험에 적합한 E.coli(DH5α)를 사용하여 competent E.coli cell을 제조해보고, 더 나아가 transformation efficiency에 대해서도 알아본다. 이러한 종류를 효과적으로 transformation 하기 위하여 박테리아는 DNA를 받아 들이는 능력을 향상시키는 물리적, 화학적 형태의 처리가 필요하다. E.coli를 포함하여 대부분의 박테리아는 일반적인 환경에서 극히 제한된 양의 DNA만을 도입한다. 효과적으로 transformation하기 위해 박테리아의 DNA를 받아들이는 능력을 향상시키는 물리적, 화학적 형태의 처리가 필요하다. 정상적인 bacteria cell에 이러한 물리적, 화학적 처리를 하여 외부의 DNA가 잘 들어갈 수 있도록 만든 cell을 competent cell이라고 한다. 이러한 competent E.coli cell을 제조할 때에는 E.coli를 log phase까지 배양하고 저온상태를 유지하면서 을 이용하는 방법으로 제조하고, competent cell이 성공적으로 완성되었는지 확인하기 위하여 heat shock을 이용하여 transformation 과정을 진행시킨다. 이번 실험에서 제조하는 competent E.coli cell은 재조합 DNA 형질전환 시에 사용될 cell이므로 급속냉동하여 보관한다.
Introduction:
닫힌 계에서 이분법으로 번식하는 미생물의 생장과정을 시간에 따라 그래프로 그리면 전형적인 생장곡선이 나타난다. 생균수에 대수를 취해 배양시간에 따라 그래프에 기록한다. 이때 얻어지는 생장곡선을 바탕으로 생장과정을 유도기(lag phase), 대수기(log phase), 정체기(stationary phase), 사멸기(death phase)의 네 개의 시기로 구분한다.(Figure.1)

참고자료

· - 박석기, 최신미생물학, 1995, 신광문화사, pp.82~83, pp.226~228
· - 김효중, 미생물학(제 6판), 2005, 라이프사이언스, pp.102~106
· - 김창한, 일반미생물학, 2000, 유한문화사, pp. 290~293
· - Lansinh M. Prescott, John P. Harley, Donald A. Klein, 미생물학(5판), 2003, 라이프사이언스, pp.101~110
· - http://en.wikipedia.org/wiki/Transformation_efficiency