SDS-PAGE, Western blot, TCA 침전법.

소개

SDS-PAGE, Western blot, TCA 침전법의 원리와 실험방법

목차

1. Subject: SDS-PAGE, Western blot, TCA 침전법.
2. Introduction
1) SDS-PAGE
2) Western blot
3) TCA 침전법(trichloroacetic acid precipitation of protein : 단백질 농축의 한 방법)

본문내용

1) SDS-PAGE
-Sodium Dodecyl Sulfate(CH3(CH2)11OSO3Na)의 약어로 음이온성 계면활성제의 일종.
-단백질의 가용화제로서 이용. 단백질의 전기영동에서 가장 일반적인 방법.
-SDS는 단백질에 이온적 결합하는 다른 micelle을 형성하는 경우도 있어 그 결합량은 polypeptide 사슬(단백질) 1에 대하여 1.2~1.5정도를 보임.
-단백질은 구성하는 아미노산에 의해서 (+), (-) 상관없이 어느 쪽이건 전하를 띄지만 SDS가 결합(SDS 처리)함으로써 일시적으로 (-)하전을 띄어 모든 분자를 양극으로 이동시키고, gel의 pore 사이즈에 의해서 분자량의 크기에 따라 각각의 단백질을 분리가 가능.
-전기영동 후에는 세로축에 분자량을 지수함수로, 가로축에는 단백질의 이동도를 나타낸 그래프로 분자량을 이미 알고 단백질의 이동도를 측정하여 검량선을 제작하여 미지의 단백질 분자량을 측정.

◆SDS-PAGE의 원리
-Sample을 loading하고 전기를 걸어주면 이온들은 (+)쪽으로 진행. (단백질, Glycine 이온, Cl 이온)
-단백질은 SDS에 둘러싸여 있어서 모두 음전하, Cl-도 음전하.
-Glycine의 경우 pI (Net Charge 가 0이 되는 pH)가 6.2이므로, pH6.8의 Stacking gel에서 일부만 음전하를 띈다.

참고자료

· Biochemistry, 5th ed., Lubert Stryer, Berg, 2006년, Tymoczko, p65, p85.
· 단백질 실험노트(上), 김승호, 2006년, 월드사이언스, p. 123-125
· http://www.takara.co.kr/pds/magazine/pdf/37/experiment.pdf PAGE－단백질의 폴리아크릴 아마이드 gel 전기영동편
· http://www.elpisbio.com/sub/support/protocols/SDS-PAGE-gel.htm
· http://100.naver.com/100.nhn?docid=156542