09.대장균의 플라스미드 추출 원리 및 실험과정

소개

1. 대장균 플라스미드 추출 방법
① 전자동 핵산 추출정제
: Chaotropic ion의 존재 하에서 Silica gel에 핵산이 흡착하는 원리를 응용한 추출 정제 ...
② 크기에 따른 분리
: 세포 파괴를 한 후 Sucrose 존재 하에서 EDTA와 lysozyme처리를 한다. 그 후 Triton ...
③ 구조에 따른 분리
: 세포 추출물에 NaOH를 첨가하여 pH 12.0~12.5정도가 되도록 만든다. 그러면
...
④ EtBr-CsCl 밀도 기울기 원심분리법
: 대량으로 획득한 플라스미드 DNA용액에는 불필요한 대장균 염색체 DNA가 혼합되어 있 ...

2. 대장균의 플라스미드 추출 실험과정
① 플라스미드를 가지고 있는 단일클론 대장균 콜로니를 영양재배지에 접종한 후, 진탕기 ...

목차

1. 대장균 플라스미드 추출 방법
2. 대장균의 플라스미드 추출 실험과정

본문내용

① 플라스미드를 가지고 있는 단일클론 대장균 콜로니를 영양재배지에 접종한 후, 진탕기에서 약 20시간동안 배양한다.
② 배양액을 원심분리하여 대장균을 침전시킨 후 배양액을 버리고 대장균을 수확한다.
③ 수확한 대장균 용액에 용액Ⅰ(glucose, EDTA, Tris-HCl, ph 8.0)을 첨가한 후 대장균과 용액Ⅰ이 균일하게 잘 섞이도록 한다. 용액Ⅰ의 EDTA는 대장균 세포벽 유지에 필요한 칼슘이온을 제거하여 세포벽의 일부분을 파괴하며, 용액Ⅰ의 포도당은 세균의 삼투압을 유지시켜 세포의 외형을 유지한다.

참고자료

· 없음