Competent Cell Preparation

소개

Competent cell을 만드는 실험보고서.

목차

1.Abstract
2.Introduction
3.Method & Material
4.Data & Result
5.Discussion
6.Reference

본문내용

1.Abstract
Competent cell을 만들고 그 효율을 확인하기 위해 실험을 진행하였다. LB 한천 평판배지에서 배양해놓았던 E. coli DH5α의 단일 콜로니를 innoculation한 LB에서 1㎖를 따서 LB가 담긴 삼각플라스크에 넣었다. 600에서의 O.D.값이 0.457될 때까지 배양한 후, 배양액을 ice에 두어 식히고 원심분리하여 pellet을 얻었다. pellet을 CaCl2용액으로 suspension하고 30분간 ice에 두었다. 그 후, 다시 원심분리하여 pellet을 얻었다. 마찬가지로 pellet를 CaCl2용액과 글리세롤 용액으로 다시 한 번 suspension하고 microtube에 분주한 뒤, 액체질소를 이용, 급랭시켜 보관하였다.
만든 competent cell의 효율을 확인하기 위해 pUC19 plasmid 1pg을 얼지 않은 competent cell에 첨가하여 transformation시킨 후, 항생제를 함유한 배지에서 배양해 효율을 확인한 결과 2×106 colony/ug의 효율을 확인 할 수 있었다.

2.Introduction
Bacteria에 있어서 유전자 recombination이 일어나게 되는 경우는 크게 transduction, conjugation, transformation의 3가지 경우가 있다. transduction은 virus를 통해 DNA fragment가 recipient cell에 침투되어 유전자 recombination이 되는 것이다. conjugation은 donor cell이 recipient cell과 물리적인 접촉을 통하여 donor cell의 DNA fragment를 recipient cell에게 주어, recipient cell은 유전자 recombination을 하는 경우로서, 진핵생물의 유성생식과 비슷한 매커니즘이다.
Bacteria의 transformation은 1944년 Avery 등에 의해 Streptococcus pneumoniae에서 최초로 밝혀졌고, 이는 유전물질이 DNA라는 것을 최초로 증명한 연구이기도 하다. 이후 transformation이라는 용어는

참고자료

· 1) T. Maniatis 외 2인 공저, Molecular cloning laboratory manual, 1982, 1st edition, Cold Spring Harbor Laboratory, 249쪽
· 2) Uldis N. Streips 외 1인 공저, Modern Microbialgenetics, 2002, 2nd edition, Wiley-Liss, 449쪽~454쪽
· 3) 김관수 외 7인 공저, 미생물학, 1994년, 초판, 대광, 399쪽~405쪽
· 4) 김창한 외 6인 공저, 일반미생물학, 2000년, 초판, 유한문화사, 292쪽~293쪽
· 5) 박석기 외 5인 공저, 최신미생물학, 1995년, 초판, 신광문화사, 226쪽~228쪽