단백질정제

소개

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목차

Ⅰ. 분리정제의 원리
⑴ 분리 기술 - 분획 원심분리, 밀도구배 원심분리
⑵ 정제 - 염석, 투석, 크로마토그래피, 전기영동

Ⅱ. 순수분리 된 단백질의 아미노산 서열 결정 방법
⑴ 교차결합의 절단과 사슬의 분리
⑵ NH2-말단(N-말단)아미노산 결정법
⑶ COOH말단(C-말단)아미노산 결정법
⑷ 펩티드 결합의 효소에 의한 분해

Ⅲ. 아미노산 조성

Ⅳ. 분자량 측정방법
⑴ Kjeldahl method
⑵ Biuret test
⑶ Lowry method
⑷ 분광학적 정량법
⑸ bradford mehod

Ⅴ. 생리생화학적 특성

- 참고문헌 -

본문내용

1. 분리정제의 원리
⑴ 분리 기술
분리 기술 - 연구할 단백질의 생물 대상체를 선택하여 세포균질액을 준비한다. 이때, 세포 의 종류에 따라 파괴법이 다른 데, 그 방법으로는 막자사발 이용, 압력 가하기, 전기 균질 기 사용, 가수분해효소 사용, 초음파 사용 등으로 세포막을 파괴한 후 세포내 물질을 준비 한다.

1) 분획원심분리(differential centrifugation)
세포 균질액 분획, 이 방법으로 정제하려는 단백질이 주로 발견되는 세포 분획을 먼저 분리해내고 이 분획을 이용해서 다시 순수 분리한다. 처음 균등액을 낮은 속도(700~1,000×g)로 10~20분간 원심분리하면, 무거운 입자인 핵과 부서지지 않은 세포가 침전된다. 그리고 미토콘드리아와 리소좀처럼 가벼운 입자는 침전물 바로 위 용액인 등장액 속에 부유하게 된다. 그 다음 등장액을 다른 원심분리관에 옮겨 더 높은 속도(15,000~20,000×g)로 10~20분간 원심분리하면 침전물 속에 미토콘드리아, 리소좀, 퍼옥시좀 등이 들어있게 된다. 마이크로좀을 포함하는 등장액을 다른 원심분리 관에 옮기고 100,000×g에서 60~120분간 원심분리 한다. 그 결과 마이크로좀(소포체단편)은 침전물 속에, 그리고 리보솜과 여러 세포막, 글리코겐 같은 과립은 등장액 속에 있게 된다. 등장액 속에 있게 된다. 마지막 등장액을 200,000×g에서 2~3시간 원심분리하면 리보솜과 고분자들이 침전물 속에 나타난다. 이때 상등액에는 단백질이 많이 포함된 세포질만이 남게 된다.
2) 밀도구배원심분리 (density-gradient centrifugation)
밀도구배원심분리에서는 편차원심분리 경우와 다르게 균질 용액 대신에 밀도기울기를 이용한다. 용액의 밀도는 튜브 아래로 내려갈수록 증가하기 때문에 원심분리 중의 대류(convection)에 의한 혼합을 방지할 수 있다. 밀도기울기 원심분리에는 속도침강원심분리와 등밀도원심분리의 두 가지 형태가 있다.

참고자료

· 한국생화학회(2002), 실험생화학, 탐구당, p.700
· 곽한식 역(2007), 생화학, 라이프사이언스, p.702
· 김의락 외11인, 최신생화학, 형설출판사, p.479
· 박인국, 생화학길라잡이, 라이프사이언스, p.559
· Campbell, Mary K, 생화학, 淸文閣, p.586
· 박인원 역, 생화학(상), (주)서울외국서적, p.490