Cmyc tag 펩타이드에 특이적인 9E10 VHH 나노바디의 개발 (The development of 9E10 VHH nanobody specific to cmyc tag peptide)

서지정보

· 발행기관 : 한국미생물학회
· 수록지 정보 : 미생물학회지 / 58권 / 3호 / 136 ~ 141페이지
· 저자명 : 김진규, 한승희, 김수현, 홍선나

초록

Cmyc tag 펩타이드 항원에 결합한 생쥐 9E10 항체의 구조에 근거하여 9E10 항체의 중 사슬 가변 부위내의 3번째 초 가변 부위가 긴 18 개의 아미노산으로 구성되어 있으며 cmyc tag 펩타이드 결합에 압도적으로 관계함을 알게 되었다. 이러한발견은 우리로 하여금 생쥐 9E10 항체의 중 사슬 가변 부위를낙타과 9E10 나노바디로 변화시키게 하였다. 낙타과 항체는약 15 kDa 정도의 크기와 높은 수용성을 갖는 중 쇄 가변 도메인만으로 구성되어 있어 VHH 나노바디로 불린다. 9E10 VHH 나노바디를 생산하기 위해 생쥐 하이브리도마 9E10 세포로부터 9E10 항체의 중 사슬 가변 부위 도메인 cDNA를 추출하였으며 이 도메인의 해독된 아미노산들을 낙타 중 사슬 가변부위 도메인의 아미노산들과 나란히 배열시켜 일치되지 않은생쥐의 아미노산들을 낙타과 아미노산들로 치환하였다. 생쥐의 9E10 중 사슬 가변 부위 도메인과 낙타화된 9E10 VHH nanobody는 각각의 유전자들을 pUC119 발현벡터로 클로닝한 후 대장균에서 발현되고 수용성 단백질로 정제되었다. 예상한대로, 낙타화된 9E10 나노바디만 수용성 단백질로 생산되었다. 본 항체는 효소면역분석법과 Western blot에서 cmyc tag 펩타이드에 대한 결합력을 나타내었다. 또한 bio-layer interferometry 방법을 사용하여 cmyc tag와 상호작용에 대한해리평형상수(KD)는 4.43 × 10-7 M~4.77 × 10-6 M로 결정되었다.

영어초록

Based on structure of murine 9E10 antibody bound to cmyc tag peptide antigen, It was found that the complementarity determining region 3 of the heavy chain variable region of the 9E10 antibody consists of 18 long amino acids, which dominantly involves in cmyc tag peptide binding. This finding led us to engineer heavy chain variable domain of original mouse-derived 9E10 antibody into a camelid 9E10 nanobody.
Since the camelid antibody consists only of a heavy chain variable domain with a size of only about 15 kDa and high solubility, it is called as 9E10 VHH nanobody. To produce 9E10 VHH nanobody, the cDNA for the heavy chain variable domain of murine 9E10 antibody was extracted from the hybridoma 9E10 cell line and its translated amino acids sequences was aligned with the camelid heavy chain variable domain sequences to replace mismatched murine amino acids with camelid amino acids. After completion of cloning of each gene into pUC119 expression vector, both original murine 9E10 heavy chain variable domain and 9E10 VHH nanobody were expressed and purified as a soluble protein in Escherichia coli. As expected, only camelid 9E10 VHH nanobody was expressed as a soluble protein. It showed the cmyc tag peptide binding activity in both enzyme-linked immunosorbent assay and Western blot. In addition, the range of dissociation constant for the interaction with the cmyc tag peptide was determined from 4.43 × 10-7 to 4.77 × 10-6 M by using bio-layer interferometry.

참고자료

· 없음