융합단백질의 발현억제에 의한 Ewing 육종 세포의 Apoptosis 유도

서지정보

· 발행기관 : 대한소아청소년과학회
· 수록지 정보 : Clinical and Experimental Pediatrics / 43권 / 7호 / 959 ~ 966페이지
· 저자명 : 이호근, 김란주, 이열, 김정수, 황평한

초록

목 적 : Ewing 육종의 약 85%에서 염색체 전좌가 보고되고 있으며, 염색체 전좌에 의하여 EWS는 각각 두 개의 Ets계 전사인자인 Fli-1, erg 등의 암유전자들과 융합되어 융합단백질을 형성한다. Ewing 육종세포에서 이 융합단백질이 비정상적인 전사조절을 활성화시키며 종양형성에 관여할 것으로 알려져 있다. In vitro의 결과이지만 Ets계 전사인자들이 전사 활성화 단백질인 CBP와 결합가능성이 보고되어 있지만 EWS-Fli-1과 EWS-erg와 CBP의 결합과 상호전사작용에 관해서는 아직 밝혀져 있지 않다. 따라서 본 연구에서는 융합단백질과 CBP와의 결합의 가능성을 알아보고자 하였다. 또한 암은 지속적인 세포의 성장과 조절되지 않는 세포사(apoptosis)로 인한 질병으로 인식되고 있으며 암의 발생에 관여하는 발암유전자나 암억제유전자가 세포의 성장과 apoptosis를 조절하는 것으로 밝혀지고 있다. 따라서 본 연구에서는 Ewing 육종 세포에 antisense 전략으로 융합단백질의 발현을 억제시킨 후 유도되는 apoptosis를 통하여 Ewing 육종의 복합 치료 방법의 개발 가능성을 검토하고자 하였다. 방 법 : 융합단백질과 CBP에 대한 antisense 발현벡터를 제작하여 각 유전자의 발현을 위하여 Ewing 육종세포에 도입시킨 후 G418로 단일클론을 분리하여 실험에 사용하였다. Antisense 발현세포에서 융합단백질의 발현을 억제시켜 crystal violet 염색과 MTT 분석으로 Ewing 육종세포의 생존력을 측정하였고, DNA fragmentation과 유세포분석으로 apoptosis, Western blot analysis로 CBP의 발현을 측정하였다.결 과 : 융합단백질 EWS-Fli-1이 발현하고 있는 Ewing 육종세포인 TC135 세포와 EWS-erg가 발현하고 있는 5838 세포에 antisense 발현벡터를 도입하여 각각의 융합단백질 발현을 억제 시켰다. 발현이 억제된 세포는 항암제이며 apoptosis 유도제인 etoposide의 저 농도에서 많은 세포가 대조세포의 성장과는 달리 생존력을 잃고 죽었다. 이들 세포는 apoptosis로 죽는 것이 확인되었고, 저 농도의 항암제 처리에 융합단백질의 발현이 억제된 세포에서만 apoptosis가 유도되었다. Ewing 육종세포의 CBP의 발현을 억제시킨 결과가 융합단백질의 발현을 억제 시킨 세포와 생존력과 apoptosis의 유도가 매우 흡사하게 나타났다. 이러한 결과로 Ewing 육종세포의 apoptosis는 융합단백질이 직접적으로 작용하고 있었으며, CBP도 apoptosis에 작용하는 것으로 나타나 융합단백질과 CBP의 상호작용이 있는 것으로 생각된다.

참고자료

· 없음