희소방선균의 seaR 단백질 발현을 통한 기능 분석 (Functional analysis of seaR protein identified from Saccharopolyspora erythraea)

서지정보

· 발행기관 : 한국미생물학회
· 수록지 정보 : 미생물학회지 / 51권 / 1호 / 39 ~ 47페이지
· 저자명 : 류재기, 권필승, 이형선

초록

방선균이 생산하는 이차대사산물은 자기조절인자(γ-butyrolactoneautoregulator)라고 불리는 저분자의 신호전달물질과 이에 특이적으로 결합하는 autoregulator receptor protein의 상호작용에 의해 조절되는 것으로 알려져 있다. 그러므로 non-host에 autoregulator receptor 혹은 pleiotropic regulator의 발현은 이차대사산물 혹은 새로운 대사화합물의 효율적인 생산을 유도할 것으로 기대된다. 희소방선균 Saccharopolyspora erythreae으로부터 receptor (seaR) 유전자의 기능을 연구하기 위해 다른 속의 균주인 Streptomyces coelicolor A3(2)로 seaR 유전자를 삽입하여 형질전환하였다. S. coelicolor A3(2)의 형질전환은 oriT, attP, ermEp*과 seaR gene 단편을 가지고 있는 ΦC31유래의 integration vector인 pEV615 (6.6 kb)를 이용하여Escherichia coli ET12567/pUZ8002를 DNA 공여체로 이용한접합전달법을 사용하여 확립하였다. seaR 유전자의 삽입 유무는 PCR방법으로 확인하였고, seaR 유전자의 전사 발현은RT-PCR방법으로 확인하였다. S. coelicolor A3(2)의 경우 표현형 microarray 실험을 통하여 seaR 유전자의 발현에 따른 표현형의 변화를 확인하였다. 특히, 표현형 microarray 실험에 나타난 tetracycline 항생제 기질에 대하여 wild type이 transformant에 비해 빠르게 성장하는 것은 항균제 감수성 검사와 일치하였다. 이는 tetracycline 생합성 유전자 및 내성 유전자의 발현 억제에 따른 변화라고 예상할 수 있으며 이를 위하여 tetracycline생합성 관련 유전자 및 내성 유전자의 발현 패턴 분석등과 같은 분자 수준에서의 연구가 필요할 것으로 생각된다.

영어초록

Secondary metabolism in actinomycetes has been known to be controlled by a small molecule, γ-butyrolactoneautoregulator, the binding of which to each corresponding receptor leads to the regulation of the transcriptional expression of thesecondary metabolites. We expected that expression of an autoregulator receptor or a pleiotropic regulator in a non-host was to begained insight of effective production of new metabolic materials. In order to study the function of the receptor protein (seaR), which isisolated from Saccharopolyspora erythraea, we introduced the seaR gene to Streptomyces coelicolor A3(2) as host strains. An effectivetransformation procedure for S. coelicolor A3(2) was established based on transconjugation by Escherichia coli ET12567/pUZ8002 with aφC31-derived integration vector, pSET152, which contained int, oriT, attP and ermEp* (erythromycin promotor). Therefore, the pEV615was introduced into S. coelicolor A3(2) by conjugation and integrated at the attB locus in the chromosome of the recipients by the φC31integrase (int) function. Exconjugant of S. coelicolor A3(2) containing the seaR gene was confirmed by PCR and transcriptional expressionof the seaR gene in the transformant was analyzed by RT-PCR. In case of S. coelicolor A3(2), a phenotype microarray was used to analyzethe phenotype of transformant compared with wild type by seaR expression. After that, in order to confirm the accuracy of the resultsobtained from the phenotype microarray, an antimicrobial susceptibility test was carried out. This test indicated that sensitivity of thetransformant was higher than wild type in tetracycline case. These results indicated that some biosynthesis genes or resistance genesfor tetracycline biosynthesis in transformant might be repressed by seaR expression. Therefore, subsequent experiments, analysis oftranscriptional pattern of genes for tetracycline production or resistance, are needed to confirm whether biosynthesis genes orresistance genes for tetracycline are repressed or not.

참고자료

· 없음