유리화동결전 인공수축과 보조부화술이 융해후 생쥐 포배아의 생존율과 부화율에 미치는 영향 (Effects of the pre-artificial shrinkage and subsequent assisted hatching on the survival and hatching rate of the vitrified mouse expanding blastocysts)

서지정보

· 발행기관 : 대한생식의학회
· 수록지 정보 : Clinical and Experimental Reproductive Medicine / 35권 / 4호 / 275 ~ 283페이지
· 저자명 : 조덕현, 고경래, 정지혜, 최종렬, 주종길, 이규섭

초록

목 적: 본 연구는 유리화 동결전 인공수축과 보조부화술(부분투명대절개)이 유리화동결 후 생쥐 포배아의 생존율과 부화율에 미치는 영향을 알아보기 위해 실행되었다. 연구방법: 생쥐 2-세포기 배아를 획득하여 G1.1과 G2.2 배양액에서 포배아까지 배양하였다. 실험은 대조구군과 3개의 처리군으로 나누었다. 인공수축과 보조부화술 없이 동결한 군(-AS/-AH)을 대조군으로 하였고, 인공수축없이 보조부화술만 처리한 군(-AS/+AH), 인공수축만 하고 보조부화술을 하지않은 군(+AS/-AH), 인공수축과 보조부화술을 동시에 처리한 군(+AS/+AH)을 처리군으로 하였다. 모든 포배아는 G10과 G10E20용액에서 각각 3분씩 평형을 실시하였고, G25E25유리화용액에 노출직후 capped pulled straw에 mouth pipette으로 loading하여 유리화동결 하였다. 융해후 24시간 동안 배양하면서 생존율과 부화율을 조사하였다. 결 과: 인공수축을 시행한 후 보조부화술을 시행한 군(+AS/+AH)과 보조부화술을 시행하지 않은 군(+AS/-AH)에서의 생존율과 부화율은 각각 98%와 100%, 92%와 41% 였으며, 인공수축을 시행하지 않고 보조부화술을 시행한 군(-AS/+AH)과 보조부화술을 시행하지 않은 군(-AS/-AH, 대조군)에서의 생존율과 부화율은 각각 54%와 96%, 58%와 34%를 나타내어 인공수축과 보조부화술이 생쥐포배아의 생존율과 부화율에 매우 효과적임을 알 수 있었다(p<0.01). 또한 capped pulled straw라고 명명한 straw를 이용한 유리화동결은 융해후 회수율이 100%였으며, 동결과 융해과정에 매우 편리하여 배아의 유리화동결에 매우 유용할 것으로 생각된다. 결 론: 인공수축과 보조부화술은 포배아의 유리화동결후 생존율과 부화율을 유의하게 향상시켜 포배아의 동결본존에 매우 효율적인 방법으로 생각된다.

영어초록

Objective: This study was conducted to investigate the effects of the artificial shrinkage and subsequent assisted hatching(PZD;patial zona dissetion) before vitrification on the survival and hatching rate of mouse expanding blastocyst. Methods: Mouse 2-cell embryos were collected and cultured in G1.1 and G2.2 to expanding blastocyst. For artificial shrinkage(AS) the micro injection pipette was inserted into blastocoele cavity and blastocoele fluid was aspirated. For assisted hatching(AH) PZD method was used. Control group was -AS/-AH and treatment groups were -AS/+AH, +AS/-AH and +AS/+AH. After AS and AH mouse blastocysts were equillibrated in G10 and G10E20 for 3min, respectively, and vitrified in G25E25 after loading on capped pulled straw. Vitrified mouse blastocysts were thawed and culture for 24hrs. The survival and hatching rate was compared among one control and three treatment groups. Results: The survival rates were 99%, 92% in +AS/+AH and +AS/-AH groups and 54%, 58% in -AS/-AH and -AS/+AH group, respectively. The survival rate was higher in +AS group than in -AS group(p<0.01). Hatching rates were 34%, 96% in -AS/-AH and -AS/+AH groups and 41%, 100% in +AS/-AH and +AS/+AH, respectively. The hatching rates was higher in +AH group than in -AH group(p<0.01). After thawing recovery rates were 100%. Conclusion: This study showed that artificial shrinkage of blastocoele cavity and assisted hatching(PZD) significantly improved the survival and hatching rate of the vitrified mouse expanding blastocsts. It was considered that the capped pulled straw vitrification procedure was available for vitrification of blastocysts.

참고자료

· 없음