메산지움 세포에서 Transforming Growth Factor-β1Antisense를 이용한 섬유화 물질의 억제 (Attenuation of the Expression of Fibrogenic Molecules by Transforming Growth Factor-β1 Antisense inCultured Rat Mesangial Cells)

서지정보

· 발행기관 : 대한신장학회
· 수록지 정보 : Kidney Research and Clinical Practice / 22권 / 4호 / 349 ~ 357페이지
· 저자명 : 신규태, 김흥수

초록

배 경:당뇨병성 신증에서 transforming growth factor-β1 (TGF-β1)이 메산지움 세포에서 증가되고, 이렇게 증가된 TGF-β1은 신사구체에서 세포외 기질을 증가시키는 것으로 알려져 있다. 또한 메산지움 세포 자체도 고농도의 당에 배양하면 TGF-β1이 증가되는 것으로 알려져 있다. 본 연구에서는 adenovirus vector를 이용하여 antisense TGF-β1 유전자를 고농도의 당에 배양한 메산지움 세포에 전달하고, 이렇게 하는 것이 TGF-β1을 비롯한 여러 섬유화 물질에 어떠한 영향을 미치는 지를 관찰하고자 하였다.
방 법:TGF-β1 mRNA의 start codon을 중심으로 -162에서 ＋168까지의 330 bp의 DNA를 분리하고, 이를 antisense 및 sense방향으로 adenovirus vector에 삽입한 다음, 이 adenovirus를 고농도의 당 (450 mg/dL)에 배양한 메산지움 세포에 넣은 후, TGF-β1 및 다른 여러 섬유화 물질의 mRNA 발현을 Reverse transcription-polymerase chain reaction으로 관찰하였다.
결 과:TGF-β1 antisense로 처리한 메산지움 세포에서는 TGF-β1이 의미있게 감소하였으며, 또한 collagen, fibronectin, PDGF-B와 같은 다른 물질도 이차적으로 감소하는 것을 관찰할 수 있었다.
결 론:본 연구에서는 adenovirus vector를 이용한 TGF-β1 antisense치료가 고농도의 당에 배양된 메산지움 세포에서 TGF-β1을 비롯한 여러 섬유화 물질을 효과적으로 감소시킬 수 있음을 관찰하였다.

영어초록

Background:The diabetic milieu augments the expression of transforming growth factor-β1 (TGF-β1) in mesangial cells, which, in turn, stimulates the accumulation of extracellular matrix in glomeruli. Accordingly, mesangial cells have been shown to produce increased amount of TGF-β1 when exposed to high glucose concentrations in vitro.
Methods:In the present study, we examined the effects of antisense TGF-β1 gene transfer on the expressions of several cytokines implicated in kidney fibrosis. The DNA fragment containing bases -162 to ＋168 of rat TGF-β1 sequence was isolated by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT- PCR) from rat kidney tissue. This PCR product was ligated in the xbaI-KpnI restriction sites of a shuttle vector in forward and reverse orientations and replication defective recombinant adenoviral vectors containing either the sense or antisense TGF-β1 genes under the control of a cytomegalovirus promoter - rAdTGFβ1S and rAdTGFβ1AS, respectively - were generated. Rat mesangial cells infected with recombinant adenoviruses were grown in normal (NG, 100 mg/dL) or high glucose (HG, 450 mg/dL) media for six days, and mRNA expressions of the monolayers were evaluated by RT-PCR.
Results:An adenoviral vector containing the antisense TGF-β1 gene significantly downregulated the gene expressions of TGF-β1, collagen, fibronectin and PDGF-B in cultured rat mesangial cells.
Conclusion:The expression of fibrogenic molecules were significantly attenuated by adenoviral vectors with antisense TGF-β1, and such results should be confirmed in the future study of animal models of diabetic nephropathy or chronic kidney diseases.

참고자료

· 없음