Cobalt chloride에 의해 유도되는 상피-중간엽 이행에서의 국소부착 단백질의 인산화의 역할 규명 (Role of FAK Phosphorylation in Cobalt Chloride-Induced Epithelial-to-Mesenchymal- Like Transition)

서지정보

· 발행기관 : 한국생명과학회
· 수록지 정보 : 생명과학회지 / 21권 / 2호 / 286 ~ 291페이지
· 저자명 : 남주옥

초록

본 연구는 인간 폐암세포의 저산소 상태를 재현하기 위한 CoCl_2의 처리 조건을 최적화 하였고, 최적화 된 저산소 상태에서 인간 폐암세포의 암화 과정 및 기전을 규명하였다. 인간 폐암세포, A549와 H460에 500 μM CoCl_2를 24시간 처리하였을 때 저산소 상태의 대표적인 전사인자, HIF-1α의 발현이 증가함을 확인하였고 인간 폐암세포들의 성장에는 전혀 영향을 미치지 않음을 확인하였다. 또한 CoCl_2를 처리한 인간 폐암 세포에서 상피-중간엽 이행(epithelial-to-mesenchymal-like transition)의 대표적인 마커인 E-cadherin 발현의 감소와 α-SMA의 증가를 확인하였고, 세포-세포 간 junction 부위가 깨어짐을 E-cadherin 형광염색 실험을 통하여 확인하였다. 더 나아가 CoCl_2를 처리한 인간 폐암 세포에서 상피-중간엽 이행의 분자적 기전을 밝히기 위해 세포벽에 존재하는 인테그린(integrin)의 발현을 웨스턴 블랏팅과 FACS분석을 통하여 알아본 결과, CoCl_2를 처리한 인간 폐암세포에서 인테그린 β3발현의 증가를 확인하였다. 뿐만 아니라, CoCl_2를 처리한 인간 폐암세포에서 인테그린 β3의 하부 신호전달 물질인 국소부착 카이네이즈(FAK)의 인산화가 증가함을 확인하였다. 상기의 결과로서, 국소부착 카이네이즈의 인산화를 저해함으로써 인간 폐암세포가 악성세포로 전이되는 것을 저해할 수 있을 것으로 기대 되어진다.

영어초록

Hypoxia is a common condition found in a wide range of solid tumors and is often associated with metastasis and poor clinical outcomes. In the present study, we found that HIF-1α was induced by cobalt chloride (500 μM) treatment on human lung cancer cells, A549 and H460, for 24 hr. However, cobalt chloride (500 μM) did not affect cell proliferation of A549 and H460 in 48 hr. Cobalt chloride (500 μM) additionally induced epithelial-to-mesenchymal-like transition (EMT) such as reduced E-cadherin expression and increased α-SMA expression. These results were confirmed by immunofluorecence experiment in H460 cells. E-cadherin was localized on the outer cell membrane. However, when the cells were treated with 500 μM cobalt chloride for 24 hr, diffuse E-cadherin staining was observed, characteristic of a migratory mesenchymal phenotype. We also found that cobalt chloride induced integrin β3 expression and FAK phosphorylation in human lung cancer cells using western blotting and FACS anlaysis. Our data suggest that integrin β3-induced FAK phosphorylation may be developed into target molecules for blocking tumor metastasis.

참고자료

· 없음