암세포 증식에 대한 YB-1 안티센스 올리고핵산염의 영향 (The effect of YB-1 antisense oligonucleotides on tumor cell growth)

서지정보

· 발행기관 : 대한내과학회
· 수록지 정보 : 대한내과학회지 / 71권 / 3호 / 293 ~ 301페이지
· 저자명 : 김명성, 이완식, 박창환, 주영은, 김현수, 최성규, 유종선, 정영도, 김세종, 안봉환, 신부안

초록

목적 : YB-1은 PCNA, DNA 중합효소 및 MDR 유전자 등의 전사인자로 작용한다. YB-1 유전자는 정상 어른의 간에서는 발현되지 않지만 태아의 간이나 재생 중인 간에서는 발현이 현저히 증가되어서 세포의 증식과 밀접한 관련이 있음이 보고되었다. 본 연구에서는 YB-1 유전자의 안티센스 올리고핵산염을 이용하여 YB-1의 발현을 억제함으로써 암세포 증식을 차단 할 수 있는지를 실험하고 암치료를 위한 유전자 요법으로서의 가능성을 알아보았다.방법 : 세포주로는 Chang liver, HepG2, CT-26 세포를 사용하였고, 사람의 정상세포로는 섬유아세포와 내피세포가 혼재된 조직을 사용하였다. YB-1 유전자의 안티센스 올리고핵산염으로는 YB-1 cDNA의 변역 시작 부위에 상보적인 21mer 올리고핵산염을 제작하여 사용하였다. 세포의 성장은 MTT assay를 이용하였고, 유전자 발현은 Northern blot으로 분석하였으며, 세포주기 변화는 propidium iodide로 염색하여 유식세포분석기로 분석하였다. 동물실험에서는 CT-26 세포를 1.0×105개씩 Balb/c 생쥐의 피하에 접종하여 종양을 유도하였다. 종양이 유도된 Balb/c 생쥐에 YB-1 안티센스 올리고핵산염을 꼬리정맥이나 종양조직에 주사한 후 종양의 크기를 측정하여 종양억제 효과를 관찰하였다.결과 : YB-1 안티센스 올리고핵산염은 CT-26 세포에서는 50 nM 이상 농도에서 Chang liver와 HepG2 세포에서는 10 nM 이상 농도에서 세포주의 성장을 강하게 억제하였지만 정상 조직세포의 성장에는 아무런 영향을 미치지 않았다. 안티센스 올리고핵산염을 DOTAP에 담지한 경우 세포성장 억제에 미치는 효과가 안티센스 올리고핵산염 단독 처치 보다 강하였다. 이때 YB-1의 발현은 증식이 억제된 세포주(Chang liver 및 CT-26)에서는 감소하였으나 정상조직세포에서는 변화가 없었다. 증식이 억제된 세포주에서 세포주기를 살펴보면 초기에 S phase가 감소함을 관찰 할 수 있었다. 꼬리정맥이나 종양조직에 YB-1 안티센스 올리고핵산염을 주입 시 종양의 크기가 유의하게 감소하였다.

영어초록

Background : Human YB-1 is a transcription factor that binds to the inverted CCAAT box in the promoter region of a variety of genes such as PCNA, DNA polymerase and MDR. In this study we evaluated the effect of YB-1 antisense oligonucleotides on tumor cell growth.
Methods : Chang liver, HepG2 and CT-26 cells were cultured as immortalized cell lines. The MTT (3-[4,5 -dimethylthiazol-2-yl] 2,5-diphenyltetrazolium bromide) assay, Northern blot and flow cytometric analyses were used to determine cell growth, gene expression and cell cycle changes. In an animal model, CT-26 cells were injected into Balb/c mice to induce tumor; YB-1 antisense oligonucleotides were injected into the tail vein or tumor tissue of the mice; change of tumor size was then measured.
Results : Phosphorothioated YB-1 antisense oligonucleotides suppressed the proliferation of the immortalized liver cells (Chang liver cells) and a variety of cancer cells (HepG2 and CT-26 cells); however, it did not inhibit normal cell growth. The DOTAP/antisense oligonucleotide mixture showed stronger effects on cell proliferation than did the antisense oligonucleotide alone. The YB-1 antisense oligonucleotide decreased specific expression of the YB-1 mRNA in the immortalized cancer cell lines. Flow cytometric analysis revealed that the inhibition of cell proliferation might have been due to a decrease in the S phase of the cell cycle. We found that in an animal tumor model, the administration of the YB-1 antisense oligonucleotide, in the vein or tumor tissues, decreased the tumor size significantly.
Conclusions : These results suggest that the YB-1 antisense oligonucleotide may inhibit growth of a variety of cancer cells.(Korean J Med 71:293-301, 2006)

참고자료

· 없음