난소암 세포주에서 인산화효소 억제제 flavopiridol에 의한 세포자멸사의 유도 (Induction of Apoptosis by the Kinase Inhibitor Flavopiridol in Human Ovarian Cancer Cell Lines)

서지정보

· 발행기관 : 대한부인종양학회
· 수록지 정보 : Journal of Gynecologic Oncology / 19권 / 1호 / 26 ~ 39페이지
· 저자명 : 허수영, 이준모

초록

목적: 사이클린 의존성 인산화 효소 (cyclin-dependent kinase) 억제제의 하나인 flavopiridol은 사람 종양
세포주 들에서 세포주기의 정지 및 세포자멸사를 유도하는 약제이다. 본 연구는 사람 난소암 세포주 들을 대상
으로 하여 flavopiridol을 처치한 후 세포자멸사에 미치는 영향과 그 작용 기전을 밝히려고 시도되었다.
연구방법: TOV-21G와 TOV-112D 세포주가 이용되었으며, 세포 생존도는 MTT assay로 측정하였고, 세포자멸사
는 TUNEL assay와 annexin-V binding 법으로 조사하였다. western blot 방법으로 세포자멸사 관련 단백질의 발
현을 조사하였다. MAP kinase의 활성은 non-radioactive MAP kinase assay로 측정하였다.
결과: TOV-21G와 TOV-112D에 flavopiridol로 처치하였을 경우 세포 생존도는 처치 용량 및 시간에 의존적으
로 감소하였다. 또한, TUNEL assay와 annexin-V binding 법으로 flavopiridol 처치 용량에 의존적인 세포자멸
사 유도가 일어남을 확인하였다. 두 세포주 모두에서 flavopiridol로 처치하였을 경우 anti-apoptosis 단백질
인 Mcl-1과 Bcl-XL, 및 XIAP의 발현이 감소하였으나, Bax와 Bcl-2 및 AIF의 발현은 뚜렷한 변화가 관찰되지 않
았다. p53 돌연변이를 가진 TOV-112D에서 TOV-21G에서와 같이 flavopiridol 투여 후 p53 단백질의 발현이 증가
하고, 세포자멸사가 처치 농도에 따라 증가하는 사실은 flavopiridol에 의하여 유도되는 세포자멸사는 p53과는
연관이 없는 것으로 판단되었다. 그리고 이러한 세포자멸사는 caspase 9과 caspase 3의 활성 증가와 연관이 있
고, extracellular signal-regulated protein kinase의 활성 감소와도 관련이 있는 것으로 나타났다.
결론: 비록 flavopiridol이 난소암 세포주에서 세포자멸사를 일으키고 세포독성을 나타내는 기전을 완전히
규명하지는 못하였지만, 본 연구결과는 flavopiridol이 난소암에 대하여 in vitro에서 효과적인 항종양능을 나
타낼 수 있다는 사실과 향후에 계속 치료제제로서의 연구가 가치가 있을 것임을 제시하여준다.

영어초록

Objective: Flavopiridol that inhibits cyclin-dependent kinase, can cause cell cycle arrest, induce apoptosis in human tumor cell lines. In the present study, we investigated apoptotic effects of flavopiridol and the underlying molecular mechanisms in human ovarian cancer cell lines. Methods: We used TOV-21G and TOV-112D cell lines. The cell viability was tested by MTT assay and apoptosis was assessed by TUNEL assay and annexin-V binding. Western blot was used to examine apoptosis related protein levels. MAP kinase activity was analyzed by non-radioactive MAP kinase assay kit. Results: Treatment of TOV-21G and TOV-112D cells with flavopiridol (50 nM to 1000 nM) led to a dose- and time-dependent inhibition of cell growth and survival. Dose-related induction of apoptosis was also observed in these cell lines. Flavopiridol (500 nM) induced striking decreases in the levels of the antiapoptic proteins Mcl-1, Bcl-XL, and XIAP in both cell lines. In contrast, expression of Bax, Bcl-2, and AIF was not significantly influenced by flavopiridol. Although flavopiridol resulted in accumulation of p53 in both cells, flavopiridol mediated apoptosis was p53 independent because it occurred to the same degree in TOV-112D cells in which p53 was inactivated by mutation. Flavopiridol treatment resulted in enhanced cleavage of pro-caspase 9 and activation of caspase 3. Apoptosis was associated with suppression of ERK activity. Conclusion: Although the precise mechanisms of flavopiridol mediated cytotoxicity have not been fully defined, these data suggest that flavopiridol has activity against ovarian cancers in vitro and is worthy of continued clinical development in the treatment of ovarian cancer.

참고자료

· 없음