Multiplex PCR과 Conformation Sensitive Gel Electrophoresis를 이용한 혈우병B F9 유전자 돌연변이 직접 진단법 (Direct detection of hemophilia B F9 gene mutation using multiplex PCR and conformation sensitive gel electrophoresis Ki Young Yoo, M.D., Hee Jin Kim, M.D.* and Kwang Chul Lee, M.D.)

서지정보

· 발행기관 : 대한소아청소년과학회
· 수록지 정보 : Clinical and Experimental Pediatrics / 53권 / 3호 / 397 ~ 407페이지
· 저자명 : 유기영, 김희진, 이광철

초록

목적:F9 유전자는 혈우병B의 병인 유전자이다. 기존의 RFLP 를 이용한 연관분석은 정보제공율이 55.6%에 불과하였다. 직접 염기서열 분석법은 98%의 돌연변이를 진단할 수 있지만, 고가의 비용이 든다. 본 연구는 F9 유전자를 대상으로 돌연변이의 선별검사로써 mPCR-CSGE를 사용하고, 이후 특정 유전자 부위만을 염기서열 분석하여 mPCR-CSGE의 유용성을 확인하기 위해 고안되었다.
방법:연구대상은 비혈연 관계인 27명의 혈우병B 환자였다. 직접염기서열 분석법은 독립된 다른 기관에서 시행하였고, mPCR-CSGE 선별 후 염기서열 분석법은 본 연구자의 기관에서 시행되었다. 직접 염기서열 분석법의 결과가 참고치가 되어 mPCR-CSGE 선별 후 염기서열 분석법을 정확성, 경제성, 신속성, 편이성 측면에서 비교하였다. 두가지 방법으로 진단이 되지 않는 환자에게는 MLPA를 이용하여 돌연변이를 발견하였다.
결과:직접 염기서열 분석법으로 26명(96.3%)의 환자에서 돌연변이를 확인할 수 있었다. mPCR-CSGE 선별 후 염기서열 분석법으로는 23명(85.2%)의 환자에서 돌연변이를 찾아낼 수 있었다. 1명의 환자는 MLPA로써 돌연변이를 확인할 수 있었다. 27명의 환자에게 21개의 독립적인 돌연변이가 있었다. mPCR- CSGE 선별 후 염기서열 분석법은 직접 염기서열 분석법에 비해 비용은 55.7%로 줄일 수 있었으나, 실험 단계는 더욱 복잡하였고, 시간도 하루가 더 걸렸으며, 세심한 실험상의 주의가 필요하였다.
결론:mPCR-CSGE 선별 후 염기서열 분석법은 85.2%의 높은 돌연변이 선별력을 보이고, 직접 염기서열 분석법의 57.7%의 비용만 소모하였으나, 실험과정에 세한 주의가 요구되었으며, 노동집약적이고, 실험 시간도 하루가 더 소요되었다.

영어초록

Purpose:The F9 gene is known to be the causative gene for hemophilia B, but unfortunately the detection rate for restriction fragment length polymorphism-based linkage analysis is only 55.6%. Direct DNA sequencing can detect 98% of mutations, but this alternative procedure is very costly. Here, we conducted multiplex polymerase chain reactions (PCRs) and conformation sensitive gel electrophoresis (CSGE) to perform a screened DNA sequencing for the F9 gene, and we compared the results with direct sequencing in terms of accuracy, cost, simplicity, and time consumption.
Methods:A total of 27 unrelated hemophilia B patients were enrolled. Direct DNA sequencing was performed for 27 patients by a separate institute, and multiplex PCR-CSGE screened sequencing was done in our laboratory. Results of the direct DNA sequencing were used as a reference, to which the results of the multiplex PCR-CSGE screened sequencing were compared. For the patients whose mutation was not detected by the 2 methods, multiplex ligation-dependent probe amplification (MLPA) was conducted.
Results:With direct sequencing, the mutations could be identified from 26 patients (96.3%), whereas for multiplex PCR- CSGE screened sequencing, the mutations could be detected in 23 (85.2%). One patient’s mutation was identified by MLPA. A total of 21 different mutations were found among the 27 patients.
Conclusion:Multiplex PCR-CSGE screened DNA sequencing detected 88.9% of mutations and reduced costs by 55.7% compared with direct DNA sequencing. However, it was more labor-intensive and time-consuming.

참고자료

· 없음