형광 동소 보합법(FISH)을 이용한 미세 잔류 백혈병의 검출 한계치

서지정보

· 발행기관 : 대한소아청소년과학회
· 수록지 정보 : Clinical and Experimental Pediatrics / 43권 / 10호 / 1364 ~ 1371페이지
· 저자명 : 이정현, 김소영, 김현희, 서병규, 이원배, 황경태

초록

목 적 : 미세 잔류 백혈병을 정확히 검출하여 적절히 치료하는 것은 백혈병의 완치를 위해 매우 중요하다. 형광 동소 보합법은 세포 배양 없이 확실한 백혈병 세포를 정성적 뿐 아니라 정량적으로도 측정할 수 있기 때문에 미세 잔류 백혈병을 검출하는데 이용되고 있다. 그러나 형광 동소 보합법의 검출 한계에 대한 기준이 아직 확립되어 있지 않았고 기존 염색체 변이의 종류에 따라서도 기준에 차이가 있을 것으로 추측된다. 이에 연구자들은 염색체 변이 종류마다 검출할 수 있는 최소한의 백혈병세포 농도를 밝힘으로써 임상에서 형광 동소 보합법을 이용하여 미세 잔류 백혈병을 검출할 때 판정 지침을 확립하고자 본 연구를 시행하였다. 방 법 : 단일염색체와 삼염색체 및 필라델피아 전위 유전자를 가지는 염색체 검사를 위하여 배양된 백혈병 환자의 골수 세포들을 정상 핵형을 보이는 다른 백혈병 환자의 배양된 골수 세포와 100%, 20%, 10%, 5%, 2.5%, 1%, 0.5%, 0.1%, 0%가 되도록 잘 혼합한 후 삼염색체와 단일염색체를 대상으로 한 실험에서는 각 염색체(1번, 8번, X)의 중심절 탐색자로, 전위 유전자 검출을 위해서는 bcr/abl 유전자 탐색자로 형광 동소 보합법을 시행하여 150개에서 1,000개의 세포를 계수하고 결과를 분석하였다.결 과 : 단일염색체 검출 한계 시험 결과를 보면 정상 세포군에서도 0.25%에서 0.5%의 빈도로 한 개의 신호를 나타내는 세포가 관찰되었으며 검출 한계는 1% 이상이었다. 2.5%에서 20%까지의 농도로 단일염색체 세포를 혼합한 경우 혼합 비율에 비례하여 한개의 신호를 나타내는 세포 수가 증가하였으며 모두 단일염색체 세포만 존재하는 검체에서도 2.25% 이하의 빈도로 두개의 신호를 나타내는 세포가 관찰되었다. 삼염색체 검출 한계 시험결과를 보면 정상 세포군에서는 1례에서 0.1%의 세포가 또 다른 예에서는 0.3%의 세포가 세개의 신호를 나타낸 것 이외에는 세개의 신호를 나타내는 세포는 관찰되지 않았고, 검출 한계는 0.5%였다. 1%에서 20%까지 삼염색체 세포를 혼합한 경우에는 혼합 비율에 비례하여 세개의 신호를 나타내는 세포 수가 증가하였으며 모두 삼염색체 세포만 존재하는 검체에서도 1례에서 0.2%의 세포에서는 두개의 신호만이 검출되었다. 전위 유전자 검출 한계 시험은 bcr/abl 유전자 탐색자를 이용하였는데 중심절 탐색자에 비해 신호 크기가 작고 어두웠다. Bcr/ abl 유전자 융합이 없는 정상 세포 군에서도 0.1%에서 0.4%의 세포는 bcr/abl 유전자 융합이 있는 것처럼 근접한 신호가 관찰되었고, 검출 한계는 0.5%이상이었다. 1%에서 20%까지 CML 세포를 혼합한 경우에는 혼합 비율에 비례하여 융합 유전자 신호를 나타내는 세포 수가 증가하였으며 중심절 탐색자에 비해 혼합한 세포 비율보다 높은 비율로 융합 유전자 신호가 관찰되었다. 100% CML 세포에서는 0.2-5.6%에서 융합 유전자를 발견하지 못하였다.

참고자료

· 없음