인간 배야 줄기세포로부터 조혈모세포로의 분화 배양

서지정보

· 발행기관 : 대한혈액학회
· 수록지 정보 : Blood Research / 39권 / 2호 / 78 ~ 85페이지
· 저자명 : 김석진, 김병수, 류숙원, 성화정, 박경화, 최인근, 오상철, 서재훈, 최철원, 신상원, 김열홍, 김준석

초록

배 경:본 연구는 배아 줄기세포 주는 국내에서 개발된 SNU-3 배아 줄기세포 주를 이용하여, 배아 줄기세포로부터 조혈모세포로 분화하는 효율적 배양 조건의 탐색을 목표로 계획되었다.
방 법:인간 배아 줄기세포 배양 후 처리 방법에 따른 조혈모세포 배양 효과의 차이를 규명하기 위하여 배양된 배아 줄기세포 종괴를 바로 LTC-IC assay를 시행한 대조군과 배아 줄기세포 종괴로부터 배아체(embryonic body)를 형성 후 LTC-IC assay를 시행한 실험군으로 분류하여 조혈모세포로의 배양 효율을 비교하였다. 또한 LTC-IC assay 시기에 따른 조혈모세포 분화 증식 효율을 판단하기 위하여 배양 1, 3, 5, 7 10, 14, 21일에 고 구배 면역 자장 분리법을 이용한 CD34＋ 세포 분리 및 semisolid methylcellulose-based medium 배양을 시행하여 그 결과를 분석하였고 배양 5일 째에는 유세포 분석법을 통하여 CD34＋CD41-세포를 축정하여 각 군간의 비교를 시행하였다.
결 과:대조군에서는 LTC-IC assay 후 3주까지 어느 기간에서도 CD34＋ 조혈모세포가 분리되지 않았다. 실험군에서는 배양 3～7일 사이에 CD34＋ 세포가 분리되고 CFUs 배양에서도 집락이 관찰되었음을 확인할 수 있었다. 배양기간별로 분리된 CD34＋ 세포를 살펴보면 배양 3일에는 0.7 (0.4-1.2)×104, 배양 5일에는 1.8 (1.4-2.6)×104, 배양 7일에는 0.6 (0.5-0.7)×104이었고 CFU’s 집락 수는 배양 3일에는 0.5 (0.2-0.8)×102, 배양 5일에는 1.0 (0.6-1.3)×102, 배양 7일에는 0.2 (0.1-0.4)×102이었다. 또한, 배양 1일째 및 배양 10일 이후에는 CD34＋ 세포가 분리되지 않았다. 또한 CD34＋ 세포당 배양된 CFUs 집락 수는 배양 3일에는 0.0071 배양 5일에는 0.0056 배양 7일에는 0.0033이었다. 실험군에 있어서 CD34＋ 세포 및 CFUs 집락 수의 절대치는 배양 5일째에 유의하게 가장 많았고(P<0.01) CD34＋ 세포당 배양된 CFUs 집락 수는 배양 3일에 유의하게 가장 많았다(P< 0.01). 또한 배양 5일째에 시행한 유세포검사상 CD34＋CD45- 세포가 실험군에서는 1.16% (0.92～1.97)로 대조군의 0.09% (0.00～0.23)보다 유의하게 많음이 관찰되었다(P<0.01).
결 론:SNU-3 배아 줄기세포 주를 통한 본 연구 결과, 인간 배아 줄기세포 종괴를 직접 LTC-IC assay를 시행하면 조혈모세포가 배양 검출되지 않지만 배아체를 형성시킨 후 LTC-IC assay를 시행하면 배양 3～7일 사이에 조혈모세포가 검출, 분리됨을 확인할 수 있었다.

참고자료

· 없음