Bovine 퍅미 diarrhea Virus를 이용한 포유동물세포 발현벡터의 개발

서지정보

· 발행기관 : 한국미생물학회
· 수록지 정보 : 미생물학회지 / 38권 / 2호 / 86 ~ 95페이지
· 저자명 : 이영민

초록

최근 인간을 비롯한 다양한 생명체의 genome project 연구결과 밝혀진 유전자들의 염기서열을 토대로, 생명체 구
성성분의 실질적인 역할을 하는 단백질의 기능을 밝히는 proteomics에 관한 연구의 필요성이 대두되고 있다. 따
라서, 이 연구는 post-genomics 시대에 다양한 종류의 단백질 기능과 상호작용의 기초연구에 필수적인 새로운 포
유동물세포 유전자 발현벡터를 RNA 바이러스인 소설사성 바이러스(Bovine Viral Diarrhea Virus)의 infectious
cDNA molecular clone을 이용하여 개발하였다. 먼저 BVDV의 infectious cDNA molecular clone (pNADLcIns-)을
이용하여 puromycin 항생제에 저항성을 나타내는 puromycin acetyltransferase (pac) 유전자를 삽입하여 recombinant
full-length infectious cDNA clone을 합성하였다. 합성된 recombinant cDNA clone을 주형으로 T7 RNA
polymerase를 사용하여 in vitro transcribed full-length viral RNA를 합성하였다. 합성된 viral RNA의 자가복제 여
부는 MDBK 세포에 transfection시킨 후, 32P로 metabolically label함으로써 확인하였다. 또한, transfection된 세포
에서의 바이러스 단백질 발현여부는 바이러스에 특이적으로 반응하는 anti-NS3 단클론항체를 사용하여 분석하
였다. 또한, infectious cDNA clone을 응용하여 새로운 포유동물세포 유전자 발현벡터의 개발을 위해서, 먼저 바이
러스의 구조단백질이 바이러스의 자가복제에 필수적인 지를 평가하였다. 실험결과, 각각의 구조단백질 유전자
를 deletion한 recombinant cDNA clone으로부터 합성된 viral RNA의 자가복제여부는 pac 유전자의 발현여부로
recombinant cDNA clone으로부터 합성된 recombinant viral RNA를 MDBK 세포에 transfection시킨 후,
puromycin으로 selection함으로써 할 수 있었다. Deletion 실험결과, 각각의 구조단백질 capsid 및 E0, E1, E2는 바
이러스의 자가복제에 영향을 끼치지 않음을 알 수 있었다. 이와 더불어, 바이러스의 모든 구조단백질을 함께
deletion하였을 경우에도 자가복제에는 영향을 끼치지 않는 것을 합성된 viral replicon을 이용한 실험에서 알 수
있었다. 이렇게 합성된 BVDV의 replicon을 사용하여 포유동물의 발현벡터로써 사용할 수 있는 지의 여부를 분석
하기 위해서 pac 유전자 이외에 luciferase 유전자를 사용하여 MDBK 및 HeLa, BHK 세포에서의 단백질 발현정
도를 시간 별로 분석한 결과, BVDV의 replicon을 다양한 종류의 유전자 발현벡터로 사용할 수 있음을 알 수 있었
다. 그러므로, RNA 바이러스의 하나인 BVDV의 viral replicon을 이용하여 다양한 종류의 포유동물 세포에 유전
자 발현벡터로써 사용할 수 있음으로 post-genomics 시대에 다양한 종류의 단백질 기능연구에 많은 도움이 되리
라 기대한다.

참고자료

· 없음