PC12 세포에서 CoCl2 유발 세포자멸에 대한 Bcl-2 family와 caspase의 역할

서지정보

· 발행기관 : 대한체질인류학회
· 수록지 정보 : 해부·생물인류학 / 19권 / 2호 / 137 ~ 148페이지
· 저자명 : 정지연, 박희주, 김선헌, 김원재

초록

허혈성/저산소 상태에서 신경손상을 유발하는 세포고사가 발생되는데, 이러한 신경세포자멸 기전 및 치료
방법이 아직 정립되어 있지 않다. CoCl2는 활성산소종(ROS)을 생산하는 등, 저산소 환경과 유사한 조건을 초래하
는 것으로 알려져 있다. 본 연구의 목적은 PC12 세포에서 CoCl2에 의한 저산소 상태에서 세포자멸기전에 대한
Bcl-2와 caspase들의 역할을 구명하는데 있다.
세포생장력은 MTT 방법으로 측정하였고, DNA 절편화 및 세포자멸 소체는 DNA laddering과 propidium iodide
(PI) 염색법으로 조사하였다. Bcl-2와 Bax 발현정도는 RT-PCR법, Bid, Fas/APO-1 발현과 미토콘드리아에서 세포질
로 분비된 cytochrome c는 Western blot으로 분석하였으며, caspase-3와 caspase-9 활성은 spectrophotometer 그리고
caspase-8의 활성은 fluorospectrometer에 의해 측정하였다.
CoCl2 투여는 PC12 세포수를 시간과 농도 의존적으로 감소시켰고, DNA 절편화 현상과 세포자멸 소체를 유도하
였다. 또한, 미토콘드리아에서 세포질로 유리되는 cytochrome c양이 증가되었고, caspase-9와 -3의 활성이 증가되었
다. 이러한 결과는 CoCl2 투여한 세포에서 유도된 세포자멸기전에 미토콘드리아가 매개되었음을 보여주었다. 한편,
CoCl2 투여에 의해 Fas/APO-1의 발현이 증가되었고, caspase-8 활성이 증가된 결과로 CoCl2 유도된 세포자멸 기전
에 death receptor 매개 신호경로와 연관되었음을 알 수 있었다. 또한, Bcl-2 family에 대한 RT-PCR 분석결과, 세포
자멸를 억제하는 Bcl-2 발현은 감소되었으나, 세포자멸을 자극하는 Bax발현은 증가되었으며, 한편 pro-Bid 발현은
감소되었다.
따라서, 본 실험의 결과들은 PC12 세포에서 Bcl-2 family와 caspase들이 미토콘드리아와 death receptor를 매개하
는 두 신호경로를 통해서 CoCl2 유도 세포자멸에 중요한 역할을 함을 시사하였다.

참고자료

· 없음