Escherichia coli O157:H7의 단크론성 항체 생산과 효소면역분석법의 개발 (Production of Monoclonal Antibody against Escherichia coli O157:H7 and Development of Enzyme Linked Immunosorbent Assay)

서지정보

· 발행기관 : 한국식품과학회
· 수록지 정보 : 한국식품과학회지 / 42권 / 3호 / 329 ~ 334페이지
· 저자명 : 류희정, 김정숙, 심원보, 김남수, 조용진, 정덕화, 김경열, 남보람, 남민지

초록

본 연구에서는 최근 식품이나 농축산물 등에서 빈번하게 검출되고 있는 장관출혈성 대장균인 E. coli O157:H7에 대한 단크론성 항체를 생산하고, 신속ㆍ정확하게 검색할 수 있는 간접효소면역분석법을 개발한 후 시료적용가능성을 확인하였다. 먼저 LPS,HKEC 및 FKEC를 E. coli O157:H7의 면역원으로 준비하여mouse 면역에 사용하였고, 세포융합과 cloning을 실시하여 단클론성 항체를 생산하였으며, 생산된 항체 중 높은 역가를 나타낸HKEC 4G8-5 항체로 ID-ELISA법을 개발하였다. 개발된 IDELISA법의최저검출한계는 105 cell/mL이었고, S. aureus와 Sal.
Typhimurium에 대해서 약간의 반응성을 나타내었지만 E. coli O157:H7에 대해 보다 강한 반응성을 나타내었기 때문에 E. coli O157:H7에 매우 특이적인 분석법인 것으로 확인되었다. 개발된ID-ELISA법을 이용하여 돼지고기, 소고기, 닭고기 및 새싹채소에대한 검출률 향상을 위해 각 시료를 증균한 결과, 3종의 육류와새싹채소는 각각 증균 6시간과 2시간부터 검출이 가능한 것으로나타나 기존의 증균법보다 신속하게 시료 속 E. coli O157:H7을분석할 수 있을 것으로 판단된다. 따라서 본 연구에서 개발된 IDELISA법을적용하여 농축산물 중에 존재하는 E. coli O157:H7을분석한다면 보다 신속하고 간편하게 분석할 수 있을 것으로 판단된다.

영어초록

Escherichia coli O157:H7 causes hemolytic uremic syndrome and hemorrhagic colitis in humans. The objectives of this study were to produce monoclonal antibody(MAb) against E. coli O157:H7 and to develop an enzyme linked immunosorbent assay(ELISA) for the rapid detection of E. coli O157:H7 in agri-stockbreeding. The characterization of MAb produced from hybridoma cell (HKEC 4G8-5) was validated by ELISA and Western blot. The produced MAb was specific to E. coli O157:H7 and showed weak cross-reaction to Staphylococcus aureus. The detection limit of ELISA based on 4G8-5 MAb was 105 cell/mL. Although the ELISA could not detect E. coli O157:H7 in the meat and sprout samples inoculated with 1×101 cell/10 g without enrichment, the same samples after enrichment for 6 hr were confirmed to be positive by ELISA. These results indicated that the ELISA combined with short enrichment (6 hr) is useful tool for rapid screening of E. coli O157:H7 in various samples.

참고자료

· 없음