BK 바이러스 DNA 정량을 위한 TaqMan Probe법 실시간중합효소연쇄반응법의 수행능 평가

서지정보

· 발행기관 : 대한임상미생물학회
· 수록지 정보 : Annals of Clinical Microbiology / 10권 / 2호 / 77 ~ 83페이지
· 저자명 : 정희영, 김유리, 황경아, 최병후, 박숙자, 성흥섭, 김미나

초록

배경: BK 바이러스(BKV) DNA 정량 중합효소연쇄반응법(PCR) 검사를 위해 저자들은 내부보정물질(internal control, IC)이 포함된 TaqMan probe (TP)법을 사용한 실시간 PCR을 고안하여 수행능을 평가하였다.
방법: PCR 시발체와 TP법은 BKV VP-1 부위를 목표로 하였고, VP-1 부위를 클로닝한 플라스미드 DNA를 표준물질로 사용하여 TP법의 회수율, 정밀도, 검출한계, 직선성이 유지되는 보고범위를 분석하였다. TP법에는 IC를 역치값(threshold cycle, Ct)이 33±3이 나오도록 포함되었다. 기존의 hybridization probe (HP)법 검사와 상관성을 구하기 위해 HP법 양성 35 검체와 음성 15검체를 선택하여 두 검사의 Ct값을 비교하였고, 63 임상검체(혈장 31검체, 소변 32검체)를 이용하여 두 검사의 판독 결과를 비교하였다. 63검체 중 IC 값을 측정한 53검체에서 IC의 Ct 값에 따른 양성률과 양성검체의 농도
를 비교하였다.
결과: 회수율은 101.1%였으며, 3 log/mL 검체의 변이계수는 일괄검사 내 0.017∼0.059, 일괄검사 간 0.036이었고 6 log/mL 검체의 변이계수는 각각 0.041∼0.063, 0.045였다. 검출한계는 183 copies/mL, 보고범위는 2.7 log∼12 log/mL이었다. TP법과 HP법의 Ct값을 선형회귀분석하였을 때 y=0.8912x+0.3164 (R2=0.9964)로 일차함수적 상관성을 보였다. 63개의 임상검
체에서 TP법 양성이 16검체, HP법 양성이 12검체로 두 검사간 판독 일치도는 90.4%였다. IC의 Ct 값이 36 이상은 소변 22개, 혈액 9개였다. IC의 Ct 값이 36 이상으로 연장되었을 때 양성은 7검체(22.5%)였고 이들의 평균농도는 5.9±1.7 log/mL으로 IC의 Ct가 36 이하인 22개 중 BKV 양성인 4검체(18.1%)의 평균농도 3.9±1.0 log/mL보다 높았다.
결론: TP법은 BKV 정량검사법으로 우수한 수행능을 보였다. 임상검체 특히 소변검체에서 PCR 방해물질이 존재하는 경우가 많아서 IC은 위음성과 농도가 저평가되는 경우를 판별하는 데 필수적이었다.

참고자료

· 없음