E. coli에서 GroEL/ES chaperone 공발현에 의한 활성형 cyclodextrin glucanotransferase의 생산 증대

서지정보

· 발행기관 : 한국생명과학회
· 수록지 정보 : 생명과학회지 / 12권 / 6호 / 688 ~ 693페이지
· 저자명 : 권미정, 박소림, 김병우, 김성구, 남수완

초록

Chaperone 분자는 세포 내에서 새로 합성된 polypep- tides의 misfolding을 보호하는 역할을 가진다. 이런 chaperone 분자와의 공발현은 활성형 재조합 단백질의 생산을 증가를 기대할 수 있다. 본 연구에서는 E. coli에서 B. macerans 유래 cyclodextrin glucanotransferase (CGTase)의 활성형 생산에 GroEL/ES chaperone과의 공발현의 효과에 대해 조사하였다. cgt와 groEL/ES 유전자를 발현하는 pTCGT1과 pGro7은 각각 T7 promoter와 araB promoter에 의해 조절되고 이들을 E. coli cell에 co-transformation 시켰다. 재조합 E. coli에서 IPTG와 L-arabinose의 최적 농도를 결정하기 위해 행한 결과 1 mM IPTG, 0.3 mg L-arabinose/ml 에서 가장 높은 CGTase 활성을 나타내었다. 그리고 tube에서는 L-arabinose와 IPTG를 각각 0.4∼0.5 OD600과 0.8∼1.0 OD600에서 첨가하였을 때 활성형 CGTase의 생산이 증가되었다. GroEL/ES 공발현 조건에서는 가용성 CGTase 활성이 0.7∼0.73 unit/ml로 단독 발현의 0.36∼0.56 unit/ml에 비해 약 1.5 배 정도 증가함을 알 수 있었다. SDS-PAGE 분석에서는 GroEL/ES 공발현 조건에서 총 CGTase의 33.6%정도가 가용성 형태로 생산됨을 알 수 있었다.

참고자료

· 없음