상업용 동결보호제를 이용한 한국재래닭(오계) 원시생식세포의 동결 보존 (Cryopreservation of Primordial Germ Cells(PGCs) from Korean Native Chicken(Ogye) Embryos using Commercial Cryoprotectants)

서지정보

· 발행기관 : 한국가금학회
· 수록지 정보 : 한국가금학회지 / 40권 / 3호 / 163 ~ 169페이지
· 저자명 : 김현, 김동훈, 한재용, 도윤정, 김재환, 김영신, 성환후, 고응규, 김성우

초록

가금의 정액 동결 보존은 보고되고 있지만, 큰 난황의 구조 등과 같은 이유로 암컷의 유전물질의 보존은 불가능한 실정이다. 닭에 있어 닭원시생식세포(PGCs)의 동결 보존은 암컷과 수컷 양쪽의 유전물질을 보존할 수 있는 대체 방법이다. 본 연구에서 원시생식선으로부터 분리방법은 5.5일(stage 28 : 5.5일령(Hamburger and Hamilton, 1951)) 동안 발생한 수정란의 초기배자를 실체 현미경하에서 예리한 핀셋을 이용하여 원시생식선 부분만을 분리한 후, MACS 방법으로 정제하였다. 두 개의 상업적으로 사용되는 동결보호제(A와 B)와 10% EG + 15% FBS를 동결보호제로 하는 대조군을 각각 닭 PGCs의 동결 및 융해에 이용하였다. 동결 및 융해 후의 닭 PGCs의 회복율은 A(35.5%), B(60.5%) 그리고 대조군에서는 52.8%를 각각 확인하였다. 52.8%의 닭 PGCs의 회복율을 보인 대조군과 동결보호제 B 처리군 간에는 유의적인 차이를 보이지 않았다. 그러나 두 처리군에 비해 동결보호제 A는 35.5% 유의적으로 낮았다. 하지만, 동결 및 융해 후의 닭 PGCs 생존율은 각각 A(77.9%), B(77.4%) 그리고 대조군(81.6%)으로 보였다. 두 처리구 간에 유의적인 차이는 없었다. 본 연구는 배자 발생 초기의 원시생식선으로부터 채취한 닭 PGCs는 상업적으로 이용되고 있는 동결보호제(A와 B)를 사용해서 동결할 수 있다는 것을 확인했고, 생존율에 나쁜 영향을 주지 않고 액체질소에 성공적으로 보관할 수도 있음을 시사하고 있다.

영어초록

Cryopreservation of poultry semen has been reported, but preservation of female genetic material has not been possible because of the unique anatomical and physiological characteristics of the avian egg. Thus an alternative strategy for conservation of oviparous species of animals must be developed. Recent technological developments for producing germline chimeras by the transfer of primordial germ cells (PGCs) into recipient embryos has enabled the conservation and retrieval of chicken genetic resources in their complete form. In the present study, fertilized eggs were incubated for about 5.5 days to obtain embryos at stage 28. The whole embryo was collected from the germinal gonad using a fine glass micro pipette under a microscope. The PGCs were then purified using MACS method. Two commercially available cryoprotectants (A and B) were used to preserve the PGCs, and EG were used as a control. The average recovery rate of PGCs after thawing was 35.5% and 60.5% with the A and B treatments, respectively. There was no significant difference between B treatments and control, which showed an average recovery rate of 52.8%. However, the recovery rate obtained using A cryoprotectant (35.5%) was significantly lower than using treatment control and B. The average viability of the PGCs after thawing were 77.9% and 77.4% for cryoprotectants A and B, respectively, and the control were was 81.6%. There was no statistically significant difference between the two treatments and control. It was concluded that all of the available cryoprotectants examined in this study could be used for preservation of PGCs from embryos. Further experiments to produce germline chimera from PGCs preserved using this techniques are strongly recommended.

참고자료

· 없음