쥐 고정, 절편, 염색보고서

소개

창의생명과학실험과목에서 높은 성적을 받았던 레포트입니다.

Sprague-Dawley Rat을 마취 후 고정시키고 pbs관류 후, 뇌를 분리시켜 4% pfa에 담가 overnight 하여 고정시켰습니다. 그리고 vibratome과 cryostat를 이용해 뇌 절편을 제작하고 이를 메틸렌 블루로 염색하여 조직 표본을 제작하였습니다. 조직 표본 제작 과정에선 permount를 사용했습니다.
해당 과정을 상세히 작성해두었고 현미경으로 관찰한 결과를 rat brain atlas 사이트와의 비교를 통해 영역을 파악하였습니다.

논의 단계에선 실험 시사점 및 실험 내용의 응용점 및 실험 개선점에 대해서도 꼼꼼히 작성해두었습니다.

목차

Ⅰ. 서 론
1. 실험 목적 및 필요성
2. 실험 이론

Ⅱ. 실험 방법
1. 주의할 점
2. 실험 준비물
3. 실험 방법

Ⅲ. 실험 결과
1. 조직 고정 결과
2. 조직 절편 결과
3. 조직 염색 및 표본 완성 결과
4. 현미경 관찰 결과

Ⅳ. 논의
1. 결과에 대한 논의
2. 실험의 시사점
3. 본 실험 내용의 응용 및 적용
4. 본 실험의 문제점 및 개선할 점

Ⅴ. 다른 샘플 관찰 시사점

VI. 참고문헌

본문내용

1) 실험 목적
동물 장기는 보통 3차원 구조이며 불투명하므로, 조직 및 세포 형태의 명확한 관찰을 위해선 고정, 절편, 염색 과정이 수반되어야 한다. 따라서 이번 실험에선 Rat의 Brain을 고정, 절편, 염색과정을 거쳐 효과적으로 관찰하기 위한 동물 조직 표본을 제작하는 것을 목적으로 두고 있다.

2) 실험의 필요성
조직 절편의 제작은 세포와 조직의 형태를 명확히 관찰할 수 있도록 하고, 이 과정에선 고정과, 절편 제작, 염색의 과정이 필요하다. 따라서 해당 각각의 과정의 필요성을 정리하면 다음과 같다.
① 고정의 필요성
순천향대학교 기초과학연구소의 “광학현미경 관찰을 위한 동물 조직표본 제작과정에서 고정 및 염색의 중요성” 논문에 따르면 “고정의 필요성은 1)조직 절편의 주요 성분인 단백질의 변성을 통한 형태 파괴 방지, 2) 세균에 의한 부패 방지, 3) 염료의 매염을 촉진하는 것 등이다.”라고 언급하고 있는 것을 확인할 수 있으며, 추가적으로 비고정한 조직에서의 기관은 관찰이 어려웠고 명확한 형태를 유지하지 않았다고 언급했다. 따라서 이러한 이유에서 손상이 최소화된 절편의 제작을 위해선 고정 과정이 가장 먼저 수반되어야 한다.
② 절편 제작의 필요성
절편 제작은 내부 기관이 3차원 구조인 동물 장기를 세분화하여 부위별 관찰하기 위해 진행된다. 실험의 목적에 따라 두께를 조절하고 방향을 조절함으로써 효과적인 관찰을 유도해야한다. 이때 얇은 조직을 제작하면 구조물이 존재하지 않거나 염색이 효과적으로 이루어지지 않을 가능성이 존재하며, 두꺼운 조직을 제작하면 검은 구조물의 상이 관찰되어 세부적인 관찰이 어려워진다. 따라서 이러한 이유로, 절편을 제작함으로써 관찰을 유용하게 할 필요성이 존재한다. 실험에선 Rat brain의 구조를 Vibratome을 이용해 100mum의 절편을 제작하였다.
③ 염색의 필요성
염색은 조직의 특징을 효과적으로 파악하고 관찰하기 위해 진행한다.

참고자료

· 강영희 저. 2008.