생화학실습 보고서 - Lowry-Folin 법을 이용한 단백질 정량

소개

생화학 실험 보고서입니다.
Lowry-Folin 법을 이용한 단백질 정량 실험
Lowry-Folin 법으로 설탕용액, urea, Tris-Cl, 미지 단백질 흡광도 측정 후 고찰하였음.

목차

1. 실험목적
2. 이론
3. 실험 시약 및 기구
4. 실험 방법
5. 실험 결과
6. 고찰
7. 참고 문헌

본문내용

1. 실험목적
단백질 정량하는 방법에 대해 학습하고, 그 방법 중 하나인 Lowry-Folin 법을 이용하여 미지의 단백질을 정량한다. BSA 표준용액과 흡광도, 단백질의 발색반응을 사용하여 단백질 농도를 알아낸다.

2. 이론
단백질 정량은 일반적으로 단백질의 발색반응과 흡광도 측정을 사용한다.
단백질은 농도에 비례하여 발색하기 때문에, 흡광도 측정으로 농도를 분석할 수 있는 것이다. 발색반응은 발색이나 색이 변하는 반응을 수반하는 화학 반응이다. 농도를 알고 있는 단백질의 흡광도를 측정하여 표준곡선을 얻고, 농도를 모르는 단백질의 흡광도를 통해 농도를 알아내어 정량한다. 단백질은 구성단위인 아미노산이 펩타이드 결합에 의해 형성된 중합체이다. 이때 펩타이드 결합은 한 아미노산 분자의 카복실기와 또 다른 아미노산 분자의 아미노기에서 물 분자를 제거하여 생성되는 결합이다.
즉, 탈수 과정이 일어나며 축합 반응의 예로, 세포에서 일어나는 일반적인 반응이다.
단백질의 정량 방법은 어떠한 형식으로 단백질을 발색하게 만드는지에 따라 구분할 수 있다. Ultraviolet-visible spectroscopy는 UV-vis 영역의 광원을 이용하여 시료의 특성을 알아내는 방식이다. 특별한 발색반응을 하지 않은 상태의 흡광도 측정으로 사용한다. 다음으로 Biuret protein assay는 구리 이온이 단백질 내 펩타이드 결합과 반응하여 특정 파장의 빛을 흡수하는 복합체를 형성하는 원리를 이용한 단백질 정량법이다. 구리는 펩타이드 결합이 있을 때 산화돼서 반응한다.
Biuret 시약은 단백질 내 펩타이드 결합과 반응해서 보라색 복합체를 형성하는 구리 이온을 포함한다. Lowry protein assay는 Biuret protein assay에 몇가지 요소가 추가된 정량법이다.

참고자료

· 민철기, 강창수, 생물학실험서, 1판, 라이프사이언스, 2004
· 네이버 백과사전