[충남대] 세포생리학실험 - HEK293T cell 계대배양과 genomic DNA 및 total RNA 추출

소개

충남대 세포생리학실험 보고서 입니다! (A+)

목차

I. 서론
II. 재료 및 방법
III. 결과
IV. 논의
V. 참고문헌

본문내용

HEK293(Human embryonic kidney 293) 세포는 아데노바이러스 type 5 DNA의 절편에 노출시켜 형질전환된 HEK 세포이다[1]. HEK293T, HEK293S, HEK293SG 등 다양한 유도체가 확립되었다[1]. 그 중 HEK293T 세포는 SV40(the simian virus 40) T 항원을 발현하는 HEK293 세포에서 유래하여, SV40 복제 기점을 포함하는 플라스미드의 복제를 통해 높은 단백질 발현을 유도한다[1].
다세포생물체의 세포를 연구하는 중요한 방법 중의 하나는 생물체에서 분리된 세포를 실험실에서 배양해 실험을 수행하는 것이다[2]. 세포 배양법을 이용함으로써, DNA 복제 기작, 유전자 발현, 단백질 합성과 처리, 세포 분열 등 포유동물에 대한 세포생물학 연구가 가능해졌다[2]. 또한 동물 세포 배양으로 동물체에서 일어나는 세포 성장과 분화를 조절하는 신호전달 기작에 대한 연구가 가능해졌다[2]. 과학이 더욱 발달되면서 세포 하나의 수준에서 모든 생명현상을 찾으려는 노력이 전개되었고 이는 오늘날 분자생물학이라는 영역을 개발케 하였다[3].
동물 조직으로부터 세포를 분리해서 만든 세포배양을 일차 배양(primary culture)이라고 한다[2]. 일반적으로 일차 배양에서 세포는 배양접시 바닥을 완전히 덮을 때까지 분열과 성장을 계속한다[2]. 그 후 세포 일부를 떼어내서 새 배양접시에 옮기면 낮은 밀도로 배양을 다시 계속할 수 있다[2]. 이 과정을 여러 번 반복할 수는 있지만 대부분의 정상 세포는 한계를 가지고 있다[2]. 이와는 달리, 배아줄기세포 또는 종양에서 분리한 세포는 세포 배양에서 무한정 증식할 수 있는데, 이를 불멸 세포주(immortal cell line)라고 부른다[2]. 이러한 세포주는 연속적이며, 균질한 세포 집단을 제공할 수 있으므로, 실험적 조작, 클론화, 증식 등의 연구에서 매우 유용하게 사용된다[2].
세포가 배양용기에서 증식하여 포화상태가 되면 일부 세포들은 떨어져 나가거나 하나씩 분산되어 결국 죽게 된다[4]. 더욱이 떨어져 나간 세포들은 세포 위에 부착되어 세포의 배양액간의 접촉면적을 감소시킬뿐만 아니라 죽은 세포들에서 분비되는 독성에 의하여 영향을 받게 된다[4]. 따라서 세포계대를 하여 세포들을 알맞게 분산시킴으로써 지속적인 배양이 가능할 수 있게 된다[4].

참고자료

· Katsuya Iuchi et al. 2020. Different morphologies of human embryonic kidney 293T cells in various types of culture dishes, Cytotechnology 72, p.132
· 문자영 외16인. 2021. 세포학 분자적 접근, 제8판, 월드사이언스, pp.22~25
· 박승택. 1997. 조직세포배양, 계축문화사, p.179
· 박승택. 2002. 세포배양의 이해, 정문각, p.99, pp.101~103, p.108
· 김태전 외2인. 2004. 세포배양학 개론, 고려의학, p.208, p.210
· 남상욱 외2인. 2020. 유전공학의 이해, 제3판, 라이프사이언스, pp.40~42, p.44, p.46
· 대한화학회. 2010. 표준 일반화학실험, 제7판, 천문각, p.122, p.130