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DNA 연결 및 형질전환, 플라스미드 추출 및 제한효소 절단2025.11.171. T4 DNA Ligase와 DNA 연결(Ligation) T4 DNA ligase는 T4 박테리오파지에서 유래한 효소로, DNA의 3'-OH와 5'-P 사이에 phosphodiester 결합을 형성하여 DNA를 연결한다. Ligation buffer에는 Tris-HCl(pH 7.6), MgCl2, DTT, ATP가 포함되며, 각각 완충작용, cofactor 제공, 환원환경 조성, cofactor 제공의 역할을 한다. Self-ligation 방지를 위해 double-digestion(서로 다른 제한효소 사용) 또는 alkali...2025.11.17
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아가로스겔 전기영동을 이용한 플라스미드 클로닝 확인2025.11.151. 아가로스겔 전기영동 Restriction digestion 및 uncut plasmid를 통해 클로닝 여부를 확인하는 실험 방법입니다. 아가로스겔을 이용하여 DNA 샘플을 전기영동으로 분리하고, band shift 및 insert 유무를 관찰하여 클로닝 성공 여부를 판단합니다. 1X TAE buffer에 아가로스를 녹여 겔을 만들고, EtBr을 첨가한 후 DNA 샘플을 로딩하여 110V에서 전기영동을 수행합니다. 2. 플라스미드 클로닝 검증 Restriction digestion으로 처리된 DNA와 uncut plasmid를 ...2025.11.15
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인천대학교 나노바이오실험(1) Genomic DNA prep & Gel Electrophoresis2025.01.141. Genomic DNA Genomic DNA는 염색체 DNA로, Plasmid DNA와 같은 Extra-chromosomal DNA와 대조되는 개념이다. 대부분의 생물은 모든 세포에서 같은 Genomic DNA를 갖지만, 특정 gene의 발현으로 cell type과 function이 달라진다. 어떤 organism의 genomic DNA인지에 따라 바이러스, 박테리아, 진핵생물 등의 특성을 지닌다. 2. DNA 추출 방법 DNA 추출은 Lysis, Precipitation, Purification 3단계로 이루어진다. Lysis...2025.01.14
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PCR 산물 정제 실험 예비 레포트2025.11.151. PCR 산물 정제 원리 작은 DNA 조각을 정제하는 원리를 이해하고 정제 방법을 숙지하는 것을 목적으로 한다. Column을 이용한 DNA 정제 방법을 사용하여 PCR product를 정제한다. 이 과정에서 Gel & PCR purification system kit을 활용하며, 제조사의 protocol을 따른다. 정제된 DNA는 Agarose Gel 전기영동으로 농도를 확인하고 4℃에서 보관한다. 2. Column을 이용한 DNA 정제 방법 Spin column을 이용한 DNA 정제 과정은 다음과 같다. 정제할 DNA를 포함...2025.11.15
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DNA 제한효소 실험 결과 분석2025.11.161. 제한효소(Restriction Enzyme) DNA 제한효소는 특정 염기서열을 인식하여 DNA를 절단하는 효소이다. 실험에서 사용된 EcoRI는 5'-GAATTC-3' 서열을, HindIII는 5'-AAGCTT-3' 서열을 인식하여 각각 절단한다. 이들 효소는 분자생물학 연구에서 DNA 조작의 기본 도구로 사용되며, 특정 위치에서만 DNA를 절단하는 특이성을 가진다. 2. 전기영동(Electrophoresis) 전기영동은 DNA 절편을 크기별로 분리하는 기술이다. 실험에서는 아가로스 겔을 사용하여 제한효소로 절단된 DNA 절편...2025.11.16
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PCR 결과레포트: DNA 증폭 및 전기영동 실험2025.11.171. PCR (중합효소연쇄반응) PCR은 특정 DNA 영역을 선택적으로 증폭하는 분자생물학 기법입니다. 본 실험에서는 YiaT, HiA, tres, Ompc 네 가지 target DNA를 증폭시키기 위해 각각의 forward/reverse primer를 사용하여 PCR mixture를 제작했습니다. 95℃에서 변성, 54℃에서 프라이머 결합, 72℃에서 DNA 합성을 30 사이클 반복하는 온도 조건을 적용했으며, lid 온도를 105℃로 유지하여 튜브 내 온도 균일성을 확보하고 증발로 인한 반응 손실을 방지했습니다. 2. 전기영동 ...2025.11.17
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생명과학에서의 흡광도 측정 (비어-램버르트 법칙, 단백질, DNA 정량)2025.05.091. 흡광도와 Beer-Lambert's law (비어-램버르트 법칙) 흡광도(absorbance)는 물질이 특정 파장의 복사선을 얼마나 잘 흡수하는지를 나타내는 척도이다. Beer-Lambert 법칙은 흡광도와 시료의 몰농도, 빛이 물질을 통과하는 길이의 관계를 설명한다. 이에 따르면 흡광도는 빛이 물질을 통과하는 길이와 시료의 몰농도에 비례한다. 2. 분광광도법 분광광도법은 물질에 빛을 쬐어주어 물질의 에너지 상태를 변화시키고, 이를 통해 물질의 정성 및 정량 분석을 수행하는 방법이다. 자외선-가시광선 분광광도계를 이용하여 20...2025.05.09
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Colony PCR 실험 결과 및 분석 보고서2025.11.141. Colony PCR 원리 및 방법 Colony PCR은 DNA 추출이나 플라스미드 정제 없이 세균 colony에서 직접 원하는 insert를 포함하는 플라스미드를 선별하는 방법이다. 미생물 colony를 template로 사용하여 비용 절감과 시간 단축의 장점이 있으나, 목적 DNA의 돌연변이를 탐지할 수 없어 거짓 양성 결과 확률이 높다는 단점이 있다. 2. PCR 실험 오차 원인 및 개선 방안 실험 오차는 클린 벤치 미사용으로 인한 오염, 이쑤시개 재사용으로 인한 colony 오염, 피펫팅 과정의 거품 발생으로 인한 DNA...2025.11.14
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전기 영동을 통한 DNA 분리 실험2025.05.011. 전기 영동 전기 영동은 물질을 분리하는 실험 방법의 한 종류로, 전기장을 걸어준 환경에서 물질들의 이동한 거리의 차이를 이용하여 물질을 구분하는 것이다. 전기 영동의 종류에는 Zone 전기 영동, 등전점 전기 영동, 겔 전기 영동 등이 있다. 겔 전기 영동은 전류를 흘려주어 전하를 띤 분자가 겔 내부에서 이동하여 분리되도록 하는 기법이다. 2. Agarose gel Agarose gel은 agarose 분자가 교차되어 있는 형태로, 3차원적인 그물 구조를 띤다. Agarose gel 내부에는 분자가 통과할 수 있는 구멍이 있어...2025.05.01
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식물 게놈 DNA 추출 실험2025.11.151. DNA 추출 원리 및 방법 식물 세포의 세포벽, 원형질막, 핵막을 분해하여 DNA를 선택적으로 추출하는 과정. Cornell extraction buffer를 이용한 세포 용해, chloroform:isoamyl alcohol을 이용한 단백질 제거, isopropanol을 이용한 DNA 침전, ethanol을 이용한 washing 등의 단계를 거쳐 순수한 genomic DNA를 얻는다. 각 시약은 특정한 역할을 수행하며, 온도와 시간 조절이 중요하다. 2. 추출 완충액의 구성 및 역할 Cornell extraction buff...2025.11.15
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