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TECAN을 이용한 DNA quality check와 전기영동을 통한 대장균의 병원성 유형 확인2025.01.121. DNA 추출 및 정제 세포로부터 DNA를 분리하기 위해서는 먼저 세포 내 DNA가 세포 밖으로 유출될 수 있도록 세포벽 및 세포막을 분해시켜야 한다. DNA 추출은 크게 세 단계로 이루어지며, sample의 세포막을 제거하는 단계인 Lysis, DNA 구조를 제외한 불순물을 제거하는 단계인 Washing, 불순물이 필터링된 DNA 샘플만을 tube에서 용출해내는 단계인 Elution이 있다. 2. DNA quality check 추출한 DNA는 DNA quality check를 해주고, Nucleic acid quantific...2025.01.12
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박테리아에서 DNA 분리 (생화학 실험)2025.01.161. Alkaline lysis mini prep Alkaline lysis mini prep은 박테리아로부터 플라스미드 DNA를 분리하는 가장 보편적인 방법이다. 이 방법은 세포벽과 세포막을 부수고 DNA만을 분리해낸 후, 크로모좀 DNA와 플라스미드 DNA를 구분하여 순수한 플라스미드 DNA만을 회수하는 것이 핵심이다. 알칼리 조건에서 크로모좀 DNA는 변성되어 침전되지만, 플라스미드 DNA는 supercoiled 상태를 유지하여 회수할 수 있다. 2. 플라스미드 DNA 분리 과정 플라스미드 DNA 분리 과정은 크게 3단계로 이...2025.01.16
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RNA 추출, cDNA 합성 및 qRT-PCR2025.01.181. PCR (Polymerase Chain Reaction) PCR은 DNA의 상보적 가닥에 결합하는 2개의 프라이머를 동시에 사용하여 증폭을 원하는 DNA의 특정 영역만을 in vitro에서 복제, 증폭하는 기술이다. 3단계를 거쳐 DNA를 복제하는데, 변성, 결합, 신장 과정을 반복하여 DNA를 증폭시킨다. 2. RT-PCR (Reverse Transcriptase PCR) RT-PCR은 유전자에서 만들어진 RNA에서 역전사효소를 이용하여 cDNA를 생성한 후, cDNA를 주형 가닥으로 PCR을 수행하여, 유전자의 RNA 발현...2025.01.18
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DNA 추출 및 전기영동2025.01.121. DNA 추출 바나나에서 DNA를 추출하는 과정을 설명합니다. 바나나를 으깨고 소금, 세제를 섞어 세포벽을 파괴하여 DNA를 추출합니다. 에탄올을 사용하여 DNA를 침전시키고 물에 녹여 관찰할 수 있습니다. DNA는 음전하를 띠는 거대분자이며 뉴클레오타이드로 구성되어 있습니다. 2. 전기영동 추출한 DNA를 전기영동 실험을 통해 분리할 수 있습니다. 아가로즈 겔을 만들고 DNA 샘플에 loading buffer를 섞어 겔의 well에 로딩합니다. 전기장을 걸면 DNA가 음전하를 띠므로 양극 방향으로 이동하게 됩니다. DNA의 크...2025.01.12
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플라스미드 DNA 정제2025.01.121. 플라스미드 DNA 분리 플라스미드 DNA는 재조합 DNA 조작을 위한 운반체 DNA로 사용되며, 대장균에 플라스미드를 삽입하는 과정을 Bacterial Transformation이라고 한다. 대장균 세포에는 플라스미드 DNA와 염색체 DNA가 독립적으로 존재하므로, 플라스미드 DNA를 따로 분리하는 과정을 Purification of plasmid DNA라고 한다. 알칼리 용해법(Alkali lysis)은 높은 pH의 알칼리성 용액을 사용하여 세포벽과 세포막을 용해시킨 후, 산성 용액을 처리하여 플라스미드 DNA만을 분리해내는...2025.01.12
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Purification of Plasmid DNA by Mini-prep2025.01.211. Plasmid DNA Plasmid DNA는 bacterial cell의 소기관으로서 transformation 등 다양한 곳에 사용된다. Plasmid DNA는 host cell 당 적게는 1~3개, 많게는 수십 개까지 복제되기도 한다. Plasmid DNA 또한 유전자를 지녔기에 transformation을 일으킬 수 있으며, vector로서 사용되기도 한다. 2. Plasmid DNA Purification Mini-prep은 bacteria로부터 plasmid DNA만을 정제하는 실험법이다. 수확한 bacteria에 다...2025.01.21
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인천대학교 나노바이오실험(1) A 자료) 4. Plasmid perp & Gel Electrophoresis2025.01.041. Plasmid DNA 플라스미드 DNA는 세균의 세포 내에 염색체와는 별개로 존재하면서 독자적으로 증식할 수 있는 DNA이다. 유전공학에서는 세균 내 플라스미드를 세포 밖으로 빼내고 제한효소로 끊은 뒤, 필요로 하는 유전자를 삽입하여 이를 다시 세균에 넣어 배양하는 유전자재조합 기술을 사용한다. 2. Plasmid DNA 추출 방법 플라스미드 DNA를 추출하는 방법에는 크기 차이를 이용한 방법과 구조 차이를 이용한 알칼리 용해 방법(Alkaline Lysis method)이 있다. 알칼리 용해 방법은 높은 pH의 알칼리성 용액...2025.01.04
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일반생물학실험 결과레포트 [실험9] 핵산과 단백질 정량2025.05.131. 핵산 정량 실험을 통해 추출한 plasmid DNA의 농도를 spectrophotometer로 측정하였다. 측정 결과 DNA 농도는 52.00ug/ml로 나타났다. DNA의 순도를 확인하기 위해 A260/A280과 A260/A230 비율을 계산하였다. A260/A280 비율은 2.080으로 순수한 DNA 범위인 1.8-2.0을 벗어나 있어 DNA가 손상되었거나 오염되었음을 알 수 있다. A260/A230 비율은 0.881로 순수한 DNA 범위인 2.0-2.2를 크게 벗어나 있어 EDTA, 탄수화물, 유기용매 등의 오염이 있는 ...2025.05.13
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[A+ 보장!] 연세대 의대 의예과 1학년 General Biology 실험 레포트 Plasmid DNA mini-preparation and gel electrophoresis2025.01.141. 대장균 대장균은 인간을 비롯한 동물의 대장과 소장에서 발견되는 박테리아의 일종이다. 대장균은 인간에게 해를 끼치지 않으며 오히려 영양분을 소화하고 흡수하는 과정에서 인간에게 도움을 준다. 하지만 경우에 따라 식중독이나 콜레라를 유발하는 병원균으로 작용할 수 있다. 대장균은 산소의 농도나 온도의 변화에 영향을 상대적으로 받지 않으며 다양한 물질로부터 에너지를 얻을 수 있는 능력이 있어 빠르게 번식하고 쉽게 죽지 않는다. 이러한 특징 때문에 대장균은 생명공학이나 유전체 연구에서 자주 사용되는 생물이다. 2. 플라스미드 DNA 추출...2025.01.14
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Plasmid DNA 정제2025.01.131. 대장균(E. coli) 대장균(E.coli)은 Theodor Esherich의 이름을 따서 발견되어 명명된 박테리아이다. 특징으로는 그람음성의 간균이며, 포자 생성을 하지 않으며, 1-2 microns x 30-30 micron (1 micron = 0.001 mm)크기이고, 섭씨 37도에서 쉽게 자랄 수 있다. 2. Plasmid DNA Plasmid DNA란 세균 속에 주 DNA와 별도로 존재하면서 증식할 수 있는 고리 형태의 DNA로, 원핵생물과 효모 등에서 발견된다. 대장균 세포에서 분리된 Plasmid DNA는 sup...2025.01.13
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