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RT-PCR을 이용한 cDNA 합성 및 유전자 발현 분석2025.12.191. RT-PCR (역전사 중합효소연쇄반응) RT-PCR은 RNA 서열을 cDNA로 역전사하여 증폭하는 분자생물학 기법입니다. One-step RT-PCR은 한 튜브에서 역전사와 PCR이 동시에 진행되어 오염 가능성이 낮지만 단일 프라이머만 사용 가능합니다. Two-step RT-PCR은 RNA로부터 cDNA 합성 후 튜브를 옮겨 진행하므로 오염 가능성이 있지만, 여러 프라이머를 사용하여 다양한 cDNA 발현을 확인할 수 있습니다. 2. cDNA 합성 (역전사) cDNA 합성은 RNA 템플릿으로부터 상보적 DNA를 만드는 과정입니다...2025.12.19
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RT-PCR을 이용한 cDNA 합성 및 유전자 발현 분석2025.12.191. cDNA 역전사 역전사효소에 의해 mRNA로부터 상보적인 DNA(cDNA)를 생성하는 과정입니다. cDNA는 전사되고 스플라이싱이 일어난 mRNA와 염기 상보성을 보이며, 발현 가능한 mRNA의 서열과 단백질 정보를 나타냅니다. 역전사효소는 RNA template이 존재해야 DNA 합성 활성을 가지므로, 게놈 DNA 내 전사되지 않는 부분은 제거됩니다. cDNA 합성은 프라이밍, RNA-DNA 하이브리드 형성, 신장 단계를 거칩니다. 2. 역전사효소(Reverse Transcriptase) RNA template로부터 RNA ...2025.12.19
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재조합 DNA 구성 및 대장균에서의 GFP 발현2025.11.121. 재조합 DNA 구성 재조합 DNA는 서로 다른 출처의 DNA 단편을 결합하여 새로운 DNA 분자를 만드는 기술입니다. 제한효소를 이용하여 DNA를 절단하고 DNA 리가제로 연결하는 과정을 통해 목적하는 유전자를 벡터에 삽입합니다. 이 기술은 유전공학의 기초가 되며 단백질 생산, 유전자 치료 등 다양한 분야에 응용됩니다. 2. GFP 형질전환 GFP(Green Fluorescent Protein)는 녹색 형광 단백질로, 자외선 또는 청색광에 노출되면 녹색 형광을 발합니다. GFP 유전자를 대장균에 형질전환하면 형광 단백질을 생산...2025.11.12
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DNA 클로닝과 유전공학 기술2025.11.121. DNA 클로닝 기술 DNA 클로닝은 특정 유전자를 선택적으로 증폭하는 DNA 복제기술입니다. 제한효소로 DNA를 절단하고, 클로닝 벡터에 연결한 후, 숙주세포에 도입하여 DNA를 증폭시킵니다. 5단계 과정으로 진행되며: ①DNA 절단(제한효소 사용), ②벡터 선택(플라스미드, 바이러스), ③DNA 연결(DNA 리가제), ④숙주세포 이동, ⑤선별 배양입니다. 재조합 DNA 기술 또는 유전공학이라고도 불립니다. 2. 클로닝 벡터와 발현 벡터 클로닝 벡터는 DNA 증식 및 분리에 사용되며, 자가복제, 마커 선택, 제한효소 부위를 갖...2025.11.12
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DNA 모형 제작 레포트2025.05.041. DNA 모형 제작 DNA의 이중 나선 구조에 대한 3차원 모형을 만들어 봄으로써 당, 인산, 4가지 염기로 이루어진 DNA의 구조를 이해할 수 있다. DNA의 모형을 이용하여 DNA의 복제와 발현 과정을 설명할 수 있다. 2. DNA 구조 DNA는 염기(아데닌-A, 구아닌-G, 사이토신-C, 티민-T)와 디옥시리보스 5탄당 및 인산으로 된 고분자 화합물로 염색체의 주성분이며 실질적인 유전물질이다. DNA는 뉴클레오타이드로 이루어진 두 가닥의 사슬이 서로 꼬여 있는 2중 나선 구조를 이루고 있다. 3. DNA 염기 구성 아데닌은...2025.05.04
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Real-time PCR을 이용한 유전자 발현 분석2025.01.231. 전사(Transcription) 수준에서의 유전자 발현 분석 기법들 유전자 발현 분석 기법에는 Single gene analysis와 Whole genome analysis가 있다. Single gene analysis는 개별 유전자의 발현량을 확인하는 실험 기법으로 Northern Blotting과 Real-time PCR이 있다. Whole genome analysis는 세포 내 전체 유전자의 발현량을 확인하는 실험 기법으로 RNA sequencing이 있다. 2. cDNA 합성에 사용될 수 있는 primer의 종류 cDN...2025.01.23
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Taq DNA polymerase 발현, 정제 및 확인2025.12.171. Taq DNA polymerase 발현 및 정제 E.coli 숙주 세포에 pTTQ18 벡터를 이용하여 Taq DNA polymerase 유전자를 도입하고 IPTG로 유도하여 단백질을 과발현시켰다. 발현된 단백질은 enzymatic method와 detergent method로 세포벽을 파괴하여 추출하였고, ammonium sulfate의 농도 차이를 이용한 salting out 방법으로 침전시켜 정제하였다. Dialysis 과정을 통해 염을 제거하고 -80℃에서 보관하였다. Taq DNA polymerase는 호열성 세균 Th...2025.12.17
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Taq DNA polymerase의 발현 및 정제, 확인2025.11.171. Taq DNA polymerase 발현 및 정제 Thermus aquaticus에서 분리한 Taq DNA polymerase는 높은 온도에서도 변성되지 않는 특성이 있어 PCR에 널리 사용된다. E.coli를 숙주세포로 사용하여 pTTQ18 vector에 삽입된 Taq DNA polymerase 유전자를 발현시킨다. IPTG를 첨가하여 lac operon을 활성화시켜 단백질을 과발현시킨다. 세포 파괴는 lysozyme을 이용한 효소적 방법과 계면활성제를 이용한 방법을 사용하며, 고온 처리로 다른 단백질을 변성시킨다. Ammon...2025.11.17
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재조합 플라스미드 DNA 클로닝 예비2025.05.011. 플라스미드 DNA 플라스미드는 주 염색체와 분리되어 있어 독자적으로 복제가 가능한 환형 DNA이다. 대부분은 세균에 존재하며 생존에 필수적이진 않지만 특정 상황에 유용한 유전자를 포함한다. 플라스미드는 클로닝 벡터로 많이 이용되며 재조합된 플라스미드를 세균에 유입 후 증식시켜 DNA양을 늘린다. 또는 발현벡터로 세포내의 전사,번역기구를 이용해 재조합 유전자를 발현시켜 단백질을 대량 생산시킬 때도 이용 가능하다. 2. 클로닝 생명공학에서 cloning은 세포나 DNA조각을 복제하는 과정이다. 목적DNA조각을 다량 생산하거나 DN...2025.05.01
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Taq DNA polymerase 발현, 정제 및 PCR 확인2025.12.191. Taq DNA polymerase 발현 및 정제 pTTQ18 vector의 lac operon system을 이용하여 E. coli에서 Taq DNA polymerase를 과발현시킨다. IPTG를 inducer로 사용하여 지속적인 발현을 유도하고, cell disruption(Enzymatic method, Detergent method)으로 세포를 파괴한다. Heat inactivation으로 다른 단백질을 제거하고, ammonium sulfate를 이용한 salting out과 protein dialysis를 통해 목표 단...2025.12.19
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