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식물분자생물학실험 Agrobacterium Transformation 결과보고서2025.01.181. Agrobacterium competent cell (GV3101) GV3101은 Agrobacterium tumefaciens Chemically Competent Cell의 일종으로, 애기장대, 담배, 옥수수, 감자 등의 식물을 형질 전환하는데 사용될 수 있다. 여기에는 screening을 위한 rifampicin resistant gene (rif)이 미리 포함되어 있으며, gentamicin resistance gene 과 vir gene을 포함한 Ti plasmid를 운반할 수 있다. 2. Freeze-Thaw met...2025.01.18
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식물분자생물학실험 Agrobacterium 매개 식물 형질전환 예비보고서2025.01.181. Agrobacterium 매개 식물 형질전환 Agrobacterium을 매개체로 활용하여, 식물에 유전자를 도입하여 형질전환하는 방법에 대하여 학습한다. 유전적 형질전환이란 수용자 세포가 외부 유전물질을 받아들여 자신의 유전정보에 도입하는 과정을 통해 유전자의 변환이 일어나는 현상을 말한다. 식물의 유전자를 변형시키기 위한 방법으로 가장 널리 활용되고 있는 방법은 Agrobacterium 매개 형질전환이다. Agrobacterium tumefaciens는 다수의 외떡잎 혹은 쌍떡잎 속씨식물들과 겉씨식물에 DNA를 전달할 수 있...2025.01.18
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Tobacco infiltration full report2025.01.241. Agrobacterium-mediated transformation Agrobacterium-mediated transformation을 이용해 담배잎 내로 목적 유전자를 도입하여 식물 형질전환을 유도하고 세포 내 목적 단백질의 발현을 관찰하였다. A.tumafaciens의 한 strain인 GV3101로 목적 유전자(DGAT1, WRI1, MAGL4, MAGL10)와 reporter gene(eYFP)가 fusion된 Plasmid를 도입하고 이러한 GV3101을 이용해 담배잎 식물 세포의 형질전환을 유도하였다. 2. Col...2025.01.24
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식물분자생물학실험 Colony PCR 결과보고서2025.01.181. Colony PCR Colony PCR은 형질 전환 후 selective media에서 성장한 박테리아의 colony를 신속하게 screening하여 원하는 유전자가 존재하는지 확인하는 PCR 검사 기법입니다. PCR 반응 과정에서 heating step이 존재하기 때문에 대부분의 형질전환체는 lysis되어 유전물질을 방출하게 되고, 이때 방출된 유전물질을 template으로 활용하여 amplification reaction을 진행합니다. Positive Control과 Negative Control은 PCR 반응의 정확성과 ...2025.01.18
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식물 형질전환 기술 및 방법2025.12.171. Agrobacterium tumefaciens를 이용한 형질전환 Agrobacterium tumefaciens는 그람음성 박테리아로 쌍떡잎 식물에 감염되어 Ti 플라스미드의 T-DNA를 식물 세포 핵으로 전달한다. 상처 부위에서 방출되는 당과 페놀 화합물이 박테리아를 유인하고, VirA/VirG 유전자가 발현되어 T-DNA 전달 과정을 시작한다. T-DNA는 VirD1/VirD2 복합체에 의해 단일 가닥으로 절단되고, VirE2가 안정화시킨 후 virB/virD4 유전자 산물로 형성된 T-pilus를 통해 식물 세포로 이동한다...2025.12.17
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식물분자생물학: 재조합 DNA 벡터 설계 및 구성2025.12.171. DNA 수정 및 제한효소 재조합 DNA는 핵산 수정 효소를 사용하여 수정된 DNA입니다. DNA 리가제는 DNA 가닥 사이의 간격을 연결하고 포스포디에스터 결합을 형성합니다. 제한효소(엔도뉴클레아제)는 원래 세균에서 외래 DNA를 자르기 위해 사용되었으며, 팰린드롬 서열을 인식하여 절단합니다. Type II 제한효소는 분자생물학에서 가장 널리 사용되며, 동일 효소로 절단된 부위의 오버행 끝이 결합하여 재조합 DNA를 만듭니다. 2. 형질전환 및 벡터 형질전환은 재조합 DNA 분자를 숙주 세포로 옮기는 과정으로, 주로 E.col...2025.12.17
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작물육종학 - 황금쌀로 본 성공적인 육종의 예시, 원리 그리고 영향2025.05.111. 골든 라이스의 특성 골든 라이스는 Oryza sativa에 속하는 품종으로써, 일반 쌀과 달리 베타 카로틴 함량이 높아 선명한 오렌지색이 가미된 노란색, 또는 황금색을 띄고 있다. 일반 쌀 품종들은 베타 카로틴을 식물내에서 합성하지만 해당 성분이 인간이 섭취하는 부분인 영과에 포함되어 있지 않다는 문제가 있었다. 반면 골든 라이스는 유전자 조작 기술을 통해 새로운 효소를 만드는 유전자를 추가해서 종자에 베타 카로틴을 축적할 수 있도록 만들어낸 품종이다. 2. 골든 라이스의 육종법 골든 라이스는 유전자 조작 기술에 의해서 탄생한...2025.05.11
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식물분자생물학실험 Plant Transformation 결과보고서2025.01.181. Floral-dipping method Floral-dipping method는 Arabidopsis를 간단하게 형질 전환하는 방법 가운데 하나이며 1993년 Bechtold et al.(1)의 논문을 통하여 제안되었다. 이 방식은 대부분의 형질 전환된 자손에서 유전적 균일성을 확보할 수 있으며, 조직 배양 및 재생과 관련된 체세포 변이가 최소화된다는 장점이 있다. 이 방법의 주요 단점은 단 하나의 식물 종인 Arabidopsisthaliana에 대해서만 정상적으로 작용한다는 것으로, 다른 식물종에 이 방식을 활용하지못한다는 ...2025.01.18
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대장균을 이용한 DNA 기술 실험 및 분석2025.12.191. DNA 클로닝 및 형질전환 대장균 competent cell에 플라스미드를 도입하여 형질전환을 수행했다. Heat shock 방법을 사용하여 세포벽 투과성을 높였으며, LacZ 유전자를 이용한 선택 마커 시스템으로 형질전환 성공 여부를 판별했다. 흰색 colony는 유전자 삽입 성공, 파란색 colony는 삽입 실패를 나타낸다. 형질전환 효율을 높이기 위해 CaCl₂ 처리를 통해 세포벽을 약화시켰다. 2. PCR 및 젤 전기영동 Colony PCR을 통해 삽입된 DNA를 증폭하고 아가로스 젤 전기영동으로 분석했다. PCR 과정...2025.12.19
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GUS staining 실험 분석 및 결과 해석2025.11.121. GUS staining (β-glucuronidase staining) GUS staining은 식물 생명과학 실험에서 유전자 발현을 시각화하는 기법입니다. β-glucuronidase 효소가 X-Gluc 기질과 반응하여 파란색 침전물을 생성하므로, 특정 유전자가 발현되는 조직과 세포를 정확하게 관찰할 수 있습니다. 이 방법은 식물의 발달 과정, 호르몬 반응, 환경 스트레스 반응 등을 연구하는 데 널리 사용됩니다. 2. 유전자 발현 분석 (Gene Expression Analysis) GUS staining을 통해 식물 조직에...2025.11.12
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