LC/MS를 이용한 펩타이드 정량분석실험
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[기기분석실험] LC/MS를 이용한 펩타이드 정량분석실험
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2025.03.17
문서 내 토픽
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1. 액체크로마토그래피-질량분석법(LC/MS)LC/MS는 액체크로마토그래피와 질량분석을 결합한 분석기법으로, 혼합 성분을 분리하고 분자량을 측정한다. 이동상과 정지상의 친화력 차이를 이용해 물질을 분리하며, ESI(전기분무이온화) 방식으로 이온화된 시료를 질량분석기에서 m/z 값으로 분석한다. 역상 크로마토그래피를 사용하여 극성 이동상과 비극성 고정상으로 소수성 물질을 효과적으로 분리할 수 있으며, 정량분석에 주로 활용된다.
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2. 질량분석(Mass Spectrometry, MS)질량분석은 시료를 이온화하여 전기장이나 자기장에서 m/z 값에 따라 분리하고 검출하는 기술이다. 질량분석계는 이온화장치, 질량분석기, 검출기로 구성되며, 사중극자, 비행시간(TOF), 이온트랩 등의 분석기가 사용된다. 질량스펙트럼에서 m/z 값은 분자질량을 전하값으로 나눈 것이며, 연립방정식을 통해 미지의 분자량과 전하상태를 계산할 수 있다.
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3. 나노-액체크로마토그래피-질량분석법(Nano-LC/MS)Nano-LC/MS는 극소량의 시료로 정성분석을 수행하는 정밀 분석장치이다. 나노리터 수준의 매우 느린 유속으로 시료를 흘려주며, NC pump와 Loading pump의 두 가지 펌프를 이용해 trap column에 시료를 모은 후 main column을 거쳐 MS로 분석한다. 이온트랩에서 헬륨 기체를 사용하여 이온을 안정화시키며, 진공상태와 고전압이 필요한 장치이다.
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4. 펩타이드 독소 정량분석Staphylococcus epidermidis 배양상등액에서 펩타이드 독소를 분리하여 정량분석하는 실험이다. 원심분리로 세포를 제거한 후 상등액을 LC/MS로 분석하며, 표준곡선과 TIC 크로마토그램의 피크 면적을 이용해 펩타이드 농도(pmol)를 계산한다. 질량스펙트럼에서 다중 전하 이온의 m/z 값을 이용하여 분자량을 계산하고 펩타이드의 구조정보를 확인한다.
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1. 액체크로마토그래피-질량분석법(LC/MS)LC/MS는 현대 분석화학에서 가장 강력하고 널리 사용되는 기술 중 하나입니다. 액체크로마토그래피의 분리 능력과 질량분석의 선택성을 결합하여 복잡한 혼합물에서 목표 물질을 정확하게 정량 및 정성 분석할 수 있습니다. 특히 제약, 환경, 식품 분석 분야에서 필수적인 도구로, 낮은 검출한계와 높은 특이성을 제공합니다. 다양한 이온화 방식(ESI, APCI 등)의 개발로 더욱 광범위한 화합물 분석이 가능해졌으며, 고감도 분석이 필요한 임상 진단과 약물 모니터링에서 그 가치가 매우 큽니다.
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2. 질량분석(Mass Spectrometry, MS)질량분석은 물질의 분자량과 구조 정보를 제공하는 기본적이면서도 필수적인 분석 기술입니다. 이온화, 질량 분석, 검출의 세 단계를 통해 화합물의 정확한 질량과 단편화 패턴을 얻을 수 있어 물질 동정에 매우 효과적입니다. 고분해능 질량분석기의 발전으로 정확한 질량 측정이 가능해져 화학식 결정이 용이해졌습니다. 단백질, 펩타이드, 소분자 화합물 등 다양한 물질 분석에 적용되며, 생명과학 연구에서 단백질체학과 대사체학 분야의 발전을 주도하고 있습니다.
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3. 나노-액체크로마토그래피-질량분석법(Nano-LC/MS)Nano-LC/MS는 극미량 샘플 분석에 특화된 고급 분석 기술로, 기존 LC/MS의 한계를 극복합니다. 나노스케일의 컬럼을 사용하여 용매 소비를 최소화하면서도 높은 감도를 달성하며, 특히 생물학적 샘플의 미량 성분 분석에 탁월합니다. 단백질 및 펩타이드 분석, 단백질체학 연구에서 매우 중요한 역할을 하며, 복잡한 생물 시료에서 저농도 물질의 검출이 가능합니다. 다만 기술적 난이도가 높고 장비 비용이 크다는 단점이 있지만, 고감도 분석이 필수적인 임상 및 기초 연구에서 그 가치는 매우 큽니다.
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4. 펩타이드 독소 정량분석펩타이드 독소의 정량분석은 공중보건과 식품안전 관리에 매우 중요한 분석 분야입니다. 해양 독소, 곰팡이 독소, 동물 독소 등 다양한 펩타이드 독소를 정확하게 측정하기 위해서는 높은 선택성과 감도를 갖춘 분석 방법이 필수적입니다. LC/MS와 Nano-LC/MS 기술은 이러한 요구를 충족시키는 최적의 도구로, 복잡한 기질에서 독소를 신뢰성 있게 정량할 수 있습니다. 규제 기준 준수와 식품 안전성 확보를 위해 표준화된 분석 방법의 개발과 검증이 지속적으로 필요하며, 신속하고 정확한 독소 검출은 식중독 예방과 공중보건 보호에 직결됩니다.
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인천대학교 나노바이오실험(2) A+ 자료) 10. Liquid chromatography-mass spectrometry (LC/MS)을 이용한 카페인 검출 7페이지
나노바이오실험(2)오전/오후 00조전공 학번 이름Ⅰ. Abstract이번 실험은 LC/MS를 이용하여 커피에 있는 caffeine을 정량 분석하였다. 이외에도 시중에 판매하는 커피와 핫식스, 미지 시료에 있는 caffeine도 검량해 보았다. 실험 결과, LC-MS를 통해 측정한 이온화된 상태의 caffeine의 분자량은 195.1 g/mol이었다. 여기서 수소 이온의 분자량인 1 g/mol을 제외하면 194.1 g/mol이며, 이론적인 분자량인 194.194 g/mol과 비교하여 거의 일치하는 결과를 보였다. (오차율 0.048 ...2024.02.26· 7페이지 -
[예비레포트] in-sol digestion 12페이지
[생화학실험 pre-report]1. Sμbject 실험 제목: In-solution Digestoin4. Object 실험 목표: 대표적인 digestion 방법인 in-sol digestion과 in-gel digestion의 원리를 살피고, In-sol digestion을 실험해봄으로써 bottom-up proteomics process의 기본을 익힐 수 있도록 한다.5. Principle 실험 원리(1) Proteomics: 유전자의 기능을 밝히는 총체적인 연구분야를 "Functional Genomics" (이하 유전체기능분...2021.07.16· 12페이지 -
[결과레포트] In-sol digestion 8페이지
[생화학실험 post-report]1. Subject: In-sol digestion4. Date & Experiment[전체 순서]① Denaturation → ② Reduction → ③ Alkylation → ④ Dilution → ⑤ Digestion[Buffer]Dilution buffer100mM ABC buffer (pH 8.0)Denaturation8M ureaReduction1M DTTAlkylation1M IAADigestionsample : trypsin = 50 : 1 의 trypsin suspension[Pr...2021.07.16· 8페이지 -
HPLC 예비레포트 3페이지
1. Date :2. Subject : HPLC (High Performance Liquid Chromatography)3. Theory & Principle-HPLC 분리 기작혼합물의 성분물질을 이동상과 고정상을 이용하여 분리하는 방법이며, 이동상으로 액체를 사용한다. 시료의 화학물질이 녹아 있는 이동상을 펌프를 이용하여 고압의 일정한 유속으로 밀어서 충진제가 충진되어 있는 고정상인 컬럼을 통과하도록 하며 이때 시료의 화학물질이 이동상과 고정상에 대한 친화도에 따라 다른 시간대별로 컬럼을 통과하는 원리를 이용하며 이러한 화학물질을...2021.08.07· 3페이지 -
분석기계 설명 및 응용 정리 7페이지
분광광도계▒ 원 리 ▒UV 원리는 분자마다 빛을 최대로 흡수하는 파장이 다르다는 것이 기본 원리로입니다.넓은 범위의 파장의 빛을 투과시키면서 흡광도를 측정하여 흡광도가 특히 높은 파장을 찾아 물질의 정성적인 분석과 어떤 분자가 잘 흡수하는 특정한 파장의 빛을 투과시켜 흡광도를 측정함으로서 그 분자의 정량적인 분석을 하게 됩니다.▒ 용도 및 응용분야 ▒각종 유기화합물가스크로마토그래피 Gas Chromatography▒ 원 리 ▒서로 비슷한 물질이 섞인 혼합물을 분리하여 분석하는 방법이다. Gas Chromatography는 가스 혼합...2016.12.12· 7페이지
