미생물(대장균) 배양의 기초 테크닉- 배지, 멸균, 접종, 배양에 관해

소개

미생물을 배양하는데 기초적인 기술인 배지제조와 멸균법, 접종 및 배양법에 관한 레포트입니다. agar plate에 배양한 콜로니 사진도 있습니다. 만점을 받은 레포트입니다.

목차

1.abstract
2.introduction
3.materials&method
4.data&result
5.discussion
6.references

본문내용

미생물을 배양하여 생장시키기 위해서는 각종 영양분이 요구된다. 이 때 필요한 영양분을 모두 가지고 있는 물질이 바로 배지인데 이번 실험에서는 보편적으로 미생물 배양에 사용하는 배지인 LB(Lurea Bertani) 한천 평판 배지를 만들고 E.coli(DH5α)를 streaking하여 배양해 single colony를 관찰해보았다.
LB 배지 용액 100㎖는 Tryptone 1g, Yeast extract 0.5g, Sodium Chloride 1g, Agar 1.5g, DIW 100㎖를 잘 섞은 다음 습열멸균법의 하나인 고압증기 멸균법을 이용해 멸균하여 만든다. 이 때 Autoclave라는 내열, 내압성 멸균 장치를 사용하는데 고온, 고압 하에서 증기를 이용해 멸균처리를 할 수 있다. Autoclave를 이용해 121℃에서 15분간 멸균한 후 semi-solid 형태의 배지를 만들기 위해 60℃ waterbath에서 천천히 식히고 20㎖를 멸균된 Peri dish에 담아 굳힌다.
한편, 일회용 plastic loop를 사용해 미리 만들어진 Agar plate에 streaking하였다. 이는 미생물의 single colony를 얻기 위해서이다. streaking이란 loop에 E.coli cell을 적당히 묻혀 배지 위에 3~4등분 하듯이 지그재그 모양으로 줄을 긋는 것이다. streaking 후 미생물의 생장에 적절한 환경에서(37℃ incubator) 배양하고 나면 streaking을 처음 시작한 부분은 미생물의 농도가 짙어 선이 뭉쳐있는 것을 볼 수 있다. 그러나 <Figure 3>에서 보이듯이 streaking이 끝나는 부분으로 갈수록 그 농도가 옅어져 한 개씩 따로 떨어져 있는 single colony의 존재를 확인할 수 있다. single colony란 한 개의 cell로부터 배양되어 만들어진, 유전적으로 동일한 형질을 가진 cell들의 집합이다. single colony를 순수분리하여 계속 배양하면 돌연변이가 없다는 가정 하에 유전형질이 똑같은 clone cell들을 얻을 수 있으며 이를 이용하여 여러 가지 실험을 할 수 있다.

참고자료

· 최신 미생물학, 박석기, 신광문화사, 1995, pp.159~163
· 미생물학 실험, 박철희, 동화기술, 2006, pp. 201~202
· 미생물학 (6thed), Prescott,LansingM, 라이프사이언스, 2005, pp.122~123
· 대학 미생물학, 민경희, 김치경, 조민기, 탐구당, 1990, pp.99~102, 104~105