SDS-Polyacrylamide gel electrophoresis

소개

sds page 실험에 앞서 비교적 간단하게 실험에 필요한 세부사항을 정리해 놓은 레포트 입니다.

목차

실험목적
induction test한 sample을 SDS-PAGE gel에 running하여 induction condition을 확인한다.

실험 배경 및 이론

SDS- polyacrylamide gel 전기영동
SDS-PAGE에 의한 단백질의 정제법
Stacking gel과 running gel의 차이
① Stacking gel
② Running gel

실험방법

참고문헌

본문내용

실험목적
induction test한 sample을 SDS-PAGE gel에 running하여 induction condition을 확인한다.

실험 배경 및 이론
SDS- polyacrylamide gel 전기영동

정제과정에서 단백질의 순도 검정에는 SDS-PAGE 전기영동법이 가장 널리 이용되고 있다. SDS-PAGE 에서는 작은 단백질일수록 빨리 이동하기 때문에 분자량 marker와 비교함으로서, 비로써 분자량의 측정이 가능하다.
(중략)

SDS-PAGE에 의한 단백질의 정제법
단백질의 정제가 진행되어 SDS-PAGE에 있어서 활성과 대응하는 목적 단백질의 밴드가 확인되어지면, SDS-PAGE에 의한 분리되어진 gel 상에 목적 단백질을 분리하는 것이 가능하다. 이러한 방법은 간편하고 회수율도 높기 때문에 cromatograph에 의한 목적 단백질의 완전 정제가 곤란한 경우나 column의 흡착 등에 의해서 회수율이 낮을 경우에 있어서 유효한 수단으로 알려져 있다. 그리고 최근, protein sequence를 이용한 미량 단백질의 N말단 아미노산 배열의 분석이 가능하게 되었기 때문에 이러한 시료 단백질의 조제 수단으로서 SDS-PAGE가 널리 이용되고 있다. 한편 SDS-PAGE에 있어서 단일 밴드가 보여 져도 복수의 단백질이 거기에 존재하고 있을 가능성이 있기 때문에 다수의 단백질이 존재하는 것처럼 정제의 초기 단계에 이용하는 것은 아니다. 이러한 방법에 의해 생리활성을 가지고 있는 단백질을 정제하는 경우에는 SDS에 의한 실활(활성이 없음)의 유무 또는 정제 후의 재생이 가능한지를 처음부터 검토하여 하지 않으면 안 된다.
(중략)

실험방법
① induction test한 sample 20㎕와 2x S.B 20㎕를 잘 섞어준다.
② 끓는 물에 5min boiling한다.
③ sample은 gel running하기 전까지 ice에 보관한다.
④ SDS-PAGE gel만들기
⑤ boiling한 sample을 gel에 15㎕씩 loading한다
⑥ 80V로 gel running
⑦ stacking이 잘 되면 150V로 gel running
⑧ staining 40min, destaining하여 gel 확인
(중략)

참고자료

· (개정) 단백질 실험 노트 2001/ 강진아진 저/ 월드 사이언스 출판
· http://blog.naver.com/banaba1011?Redirect=Log&logNo=100046023463
· 구글 SDS-PAGE 이미지 참조