[생화학실험]PCR실험

소개

중합효소연쇄반응의 원리와 과정을 알고, 이를 알기 위해 핵산
(DNA, deoxyribonucleic acid)의 구조와 핵산의 유전형질을 전달하는 분자로 작용하는 원리, 개시제(primer) 및 핵산중합효소의 역할에 대해 이해함

목차

1. PCR의 원리
2. PCR의 구성요소
3. 핵산의 구조
4. 주의사항
5. 실험방법

본문내용

■ 실 험 목 적
중합효소연쇄반응의 원리와 과정을 알고, 이를 알기 위해 핵산(DNA, deoxyribonucleic acid)의 구조와 핵
산의 유전형질을 전달하는 분자로 작용하는 원리, 개시제(primer) 및 핵산중합효소의 역할에 대해 이해하자.

■ 이 론
□ PCR(Polymerase chain reaction)
PCR(polymerase chain reaction)은 DNA의 원하는 부분을 증폭하는 방법이다. DNA molecule의 어느부분이든지 그 border sequence만 알면 이 방법을 통해서 증폭할 수 있다. PCR은 기본적으로 denaturation, annealing extension 이렇게 세 단계로 구성되어 있고, 이 과정이 반복되면서 DNA가 증폭된다. 기본적으로 PCR을 구성하고 있는 요소들에는 DNA template, primer, dNTP, polymerase등이 있으며, PCR 과정에서 그것의 sensitivity와 accuracy에 가장 영향을 미치는 것은 primer와 temperature이다.

1. PCR의 원리
(1) Denaturation(DNA의 변성)
94℃로 가열하여 double strand DNA(ds DNA)를 single strand DNA(ssDNA)로 분리시킵니다. 높은 온도일수록 ssDNA 로 잘 이행되지만 Taq DNA polymerase도 온도가 아주 높은 상태에서는 활성이 낮아질 수 있다. 첫 cycle에서는 확실한 변성을 위하여 약 1분간 지속시킨다.
(b) Annealing(Primer의 결합)
두 가닥으로 분리된 DNA molecule에 primer가 붙는 과정이다. Primer는 그들과 상보적인 염기를 가지고 있는 DNA 서열에 달라붙는다. 이 과정이 바로 PCR의 정확도를 결정짓는 단계이며, 어느 온도로 진행되는 가는 primer의 길이와 그것을 이루고 있는 염기의 종류에 따라 달라진다. 만약에 온도가 너무 높으면 primer가 DNA molecule에 잘 달라붙지 않아 그 효율이 떨어지며, 반대로 온도가 너무 낮을 경우에는 primer가 mismatch할 확률이 높아서 정확도가 그만큼 더 떨어진다.

참고자료

· 없음