[생화학실험]Nar promoter의 gene expression

소개

yellow color 흡광도 측정을 통해 nar promoter 발현 확인하는 실험보고서

목차

1. 실험원리
2. 실험재료와 방법
3. 실험결과
4. 고찰과 결론
5. 참고문헌

본문내용

Nar operon은 promoter와 structural gene들로 이루어져 있다. promoter는 다시 regulatory protein들인 NARL과 FNR의 binding site들과 RNA polymerase binding site로 나누어진다. Structural gene들은 narG, narH, narI gene들로 나누어지는데 이들은 각각 nitrate reductase의 subunit를 이루는 NARG, NARH 및 NARI protein들을 만든다. FNR과 NARL이 각각의 regulatory site에 붙을 때에 nitrate reductase가 최대로 발현된다.
(2) 실험방법
① 2개의 LB media(50ml)가 들어있는 flask에 O/N culture를 1/50씩 inoculation한다.(1, 2로 표시)
② aerobic condition하에서 1시간 동안 배양한다. (37도 shaking incubator)
③ 2개의 Epp. tube에 flask 2로부터 1.5mlTlr 3ml을 취해서 얼음에 보관한다. assay Ⅰ
④ Flask 1에만 (50% 1ml)를 넣는다.
⑤ 2개 flask를 즉시 parafilm으로 공기가 들어가지 못하도록 입구를 봉한다.
⑥ anaerobic condition하에서 2시간 동안 키운다. (37도 incubator)
⑦ 각 culture에 대하여 assay를 한다. assay Ⅱ, Ⅲ

4. 고찰과 결론
(1) 이 결과에서 o-nitrophenol의 양을 비교해 보면 unit당 assayⅢ에서 가장 많은 양이 생산되었다. assay Ⅱ에 비해서는 2.7배 assay Ⅰ에 비해서는 43.6배가 더 생산되었다.
(2) o-nitrophenol ∝ β-galactosidase ∝ Nar promoter의 expression의 양이므로 assayⅢ에서 유전자 발현이 가장 많이 되었다는 것을 알 수 있다.
(3) 이 결과로서 유추할 수 있는 것은 Nar promoter는 anaerobic + 상태에서 유전자 발현이 가장 잘 된다는 것을 알 수 있다.
(4) 실험 시작하기 전에 예상했던 결과가 나왔다.

참고자료

· 한국생물공학회지 제11권 제4호 대구가톨릭대학교 의과대학 생화학교실 이종원