[A]서강대학교 현대생물학실험4_2차 풀레포트__Wnt,B-catenin signaling activation

소개

"[A]서강대학교 현대생물학실험4_2차 풀레포트__Wnt,B-catenin signaling activation"에 대한 내용입니다.

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Materials & Methods
4. Results
5. Discussion

본문내용

β-catenin은 성장과 유지에 중요한 gene의 transcription을 regulation하는 기능을 갖는다. β-catenin는 Wnt signal의 주요한 mediator로, 일반적으로 GSK3 같은 kinase들이 β-catenin을 인산화 시키게 되고 β-TrCP에 의해 ubiquitination되어 분해되게 된다. β-catenin은 핵으로 이동하여 TCF/LEF와 같은 transcription factor와 결합하여 성장에 도움이 되는 gene을 전사하게 하는 역할을 수행한다. 본 실험에서 β-catenin이 포함된 vector를 HEK293T cell에 transfection하여 Wnt signaling pathway를 관찰하였다. GFP-tagged β-catenin이 발현된 cell들을 형광현미경으로 관찰하고, 이후 LiCl의 처리 유무에 따른 β-catenin의 발현량 차이를 알아보았다. 형광 현미경을 통해 β-catenin은 세포질이나 핵에 골고루 분포되어 있는 것을 확인하였다. Cell lysis를 진행 후 Bradford assay를 통해 western blotting을 위한 protein quantitation을 실시하였고, SDS-PAGE를 진행한 단백질을 antibody와 BCIP/NBT 통해 visualization하였다. 135kDa에서 band를 관찰할 수 있었으며, LiCl을 처리한 쪽이 더욱 선명한 band를 얻을 수 있었다. 이후, image J를 통해 두 band의 intensity를 측정해주었으며, LiCl+와 LiCl-의 relative intensity를 계산한 결과 LiCl-에 상대적인 LiCl+의 intensity는 약 1.7배 높게 측정되었다.
Introduction
Transfection은 외래 유전자를 포함한 외부의 genetic information을 진핵세포 내로 도입하는 방법으로..

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참고자료

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