서강대학교 현대생물학실험2_2차 풀레포트_TA Cloning과 Mini-Prep, Restriction enzyme & Gel electrophoresis

소개글

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목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Materials & Methods
4. Results
5. Discussion
6. References

본문내용

Target gene을 임의의 vector에 삽입한 다음 세포에 주입하여 증폭시키는 기법을 Cloning이라 하며, 본 실험에서는 T vector를 이용하여 TA cloning을 진행하고, 추출하여 얻어낸 plasmid DNA의 insert DNA를 다시 회수하는 것을 목적으로 한다. Vector와 insert는 molar ratio 1:3으로 1.8ul를 주입해주었으며, T-vector에 insert DNA가 정상적으로 들어갔는지 Lac-Z selection을 통해 blue colony와 white colony가 생성된 것을 확인하였으며, 그 중 white colony를 따서 Alkaline lysis Mini-Prep기법을 통해 Alkaline 상태에서 plasmid DNA과 linear DNA의 denaturation 정도가 다른 것을 이용해 plasmid DNA를 분리하였다. 분리된 plasmid DNA의 전기영동 결과는 4500bp와 2000bp의 band를 형성하며, plasmid DNA의 다양한 conformation으로 인해 나타나는 것을 확인하였으며, 제한효소인 HindⅢ와 NdeⅠ를 이용하여 plasmid DNA에 들어있는 insert DNA를 분리해주었다. 전기영동을 통해 알아본 enzyme cut 결과는 750bp와 3000bp에서 band가 형성됨을 관찰할 수 있고, 이는 제한효소 처리가 정상적으로 이뤄짐을 의미한다. Uncut의 다양한 band는 plasmid DNA의 여러가지 conformation으로 인해 나타난 결과이고, 이후 사용할 pET21a vector도 절단하였다. 흡광도와 Beer-Lambert Law를 이용하여 구한 insert DNA농도는 6.5ug/ml이고 vector DNA농도는 9.75ug/ml임을 알 수 있다. alkaline phosphatase를 주입하여 5’의 phosphate를 제거

참고 자료

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