MTT assay (세포독성실험) / 101점 면역학실험 레포트 (원리, 시약 역할, result graph 작성 등)

소개

101점 받은 레포트입니다.
(100점 + 관련 논문 인용 1점)
RAW 264.7 cell에 DMSO를 농도별로 처리하여 MTT assay를 진행했습니다.

목차

1. introduction
1) MTT assay의 원리
2) MTT assay에서 DMSO의 역할

2. Material
1) Reagents
2) Equipment

3. Method

4. Result
1) MTT result table
2) MTT result graph
3) DMSO 넣은 후 well plate의 모습
4) 다른 조와의 MTT result table 비교 (%average)

5. Discussion
1) MTT result table, result graph 작성 방법
2) MTT assay 실험 결과 분석
3) 조마다 결과가 다르게 나온 이유
4) 관련 논문 비교

본문내용

1. introduction
1.1) MTT assay의 원리
Tetrazolium-based colorimetric (MTT) 검색법은 살아있는 세포의 증식 및 사멸도 변화를 측정할 수 있는 방식이며, 시료를 빠르게 판독할 수 있어 세포 독성에 관한 연구에 주로 사용된다. 이 방법은 대사 과정이 온전한 세포의 미토콘드리아 속 탈수소효소가 MTT를 MTT formazan 결정으로 환원시키는 원리를 이용한다. MTT는 세포 내부로 들어갈 수 있는 노란색 수용성 물질이며 MTT formazan은 비수용성의 보라색 물질이다. 살아있는 세포의 수가 많을수록 탈수소효소에 의해 환원된 MTT foramzan 결정이 늘어나 진한 보라색을 띤다. 적절한 파장에서 microplate reader로 흡광도를 측정함으로써 대사적으로 왕성한 세포의 농도를 확인할 수 있고, 주로 in-vitro 실험에 사용된다. MTT는 빛에 민감하기 때문에 실험 장소를 어둡게 유지하고 MTT가 담긴 conical tube를 foil로 감싸도록 한다. MTT와 비슷하게 색을 이용하여 Cell viability를 검사하는 다른 방식에는 XTT가 있다.
용액의 색이 바뀌는 자세한 원리는 다음과 같다. MTT(Tetrazolium salt)는 산화 기질(oxidized substrate)이나 적절한 효소(NADH, NADPH)로부터 전자를 받아들인다. 특히, 미토콘드리아 electron transport system의 ubiquinone과 cytochrome b, c에서 환원된다. 이러한 succinate dehydrogenase activity에 의해 노란 MTT가 보라색의 formazan 결정이 되는 것이다.

1.2) MTT assay에서의 DMSO의 역할 (2가지)
DMSO(Dimethyl sulfoxide)는 물과 혼합 가능한 극성 유기용매이며, 세포 독성을 갖는다. 본 MTT assay 실험에서 사용한 DMSO의 역할은 크게 두 가지로 볼 수 있다.

참고자료

· 전인수, 김의성, 김진, 이승종, 2006, 구강 외 노출시간에 따른 흰쥐 치아 치주인대세포 활성도의 MTT 검색법을 이용한 평가, 대한치과보존학회지, p.399
· David M. L. Morgan, 1998, Polyamine Protocols, Humana Press, p. 179-184
· Rosa Supino, 1995, In Vitro Toxicity Testing Protocols, MIMB, p. 137-149
· Molecular Devices, Microplate reader, 2022.04.05
· https://ko.moleculardevices.com/products/search-results?search=microplate%20reader&t=All
· Thermo Fisher Scientific, Tetrazolium salt, 2022.04.05
· https://www.thermofisher.com/search/results?query=Tetrazolium%20salt&persona=LearnMore&refinementAction=true
· ATCC, RAW 264.7, 2022.04.05.
· https://www.atcc.org/search#q=RAW%20264.7&sort=relevancy&numberOfResults=24
· 네이버 지식백과, 현미경, 2022.04.05
· https://search.naver.com/search.naver?where=kdic&query=%ED%98%84%EB%AF%B8%EA%B2%BD&ie=utf8&sm=tab_nmr
· 김지은, 김미숙, 강창모, 김종일, 신혜경, 최철원, 서영석, 지영훈, 2008, In-vitro와 Ex-vivo MTT Assay를 통한 직장암의 방사선 치료 감수성 예측 가능성 검증, 대한방사선종양학회지, p. 166-171