MTT (Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide) Assay

소개글

MTT 실험 후 쓴 보고서입니다..

목차

Ⅰ. PRINCIPLE
1. MTT assay
1) MTT 검색법의 원리
2) Method
(정적 cell농도 결정하기)
Ⅱ. MATERIAL
Ⅲ. METHOD
Ⅳ. RESULT
Ⅴ. DISCUSSION

본문내용

Ⅰ. PRINCIPLE

1. MTT assay

세포의 증식과 살아있는 세포를 정확하게 측정할 수 있는 기법은 생명과학 분야 특히 종양 생물학에서 필수적인 기법중의 하나이다. 새로운 항암제 개발을 위한 효능 검색이나 기존에 개발된 항암제의 감수성을 알아보기 위하여 동물실험 등의 생체에서의 적용이전에 생체 외에서의 약물이 종양세포의 성장을 억제함을 객관적으로 증명하는 과정이 선행되어야 한다. 이러한 생체 외 종양의 1차적 선별검사법은 민감하면서도 실험조작이 간편하고 단기간에 많은 대상물질의 항암작용 여부를 검사할 수 있는 시스템이 가장 이상적이다. 가장 직접적이고 이상적인 방법은 세포에 trypan blue 등을 처리한 후 현미경과 hemocytometer를 이용하여 살아있는 세포를 세는 것이지만 시간과 너무 많은 노력이 요구되므로 검체수가 많을 경우에는 사용할 수가 없기 때문에 세포의 살아있는 정도를 간접적으로 측정하려는 여러 가지 방법들이 개발되어 왔다. 항암제의 in vitro 약효 검색법에는 집락형성 분석법(clonogenic assay)과 모든 암세포에 대한 세포 독성을 측정하는 단기적 항암제 감수성 검사법(short-term chemosensitivity test)이 있다. 집락형성 분석법은 clone의 형성정도를 이용하는 방법으로서 약물효능 검색에 많이 사용되었으나 단일 세포 부유액의 준비가 어렵고, 세포의 종류에 따라 clone 형성정도가 다르기 때문에 실험자의 기준에 따라 결과가 달라질 수 있으며 결과를 얻기까지 많은 시간이 소요되는 등의 단점 때문에 1차 검색에는 적합하지 않다. 단기 검사법은 항암물질 처리후ㅡ 생존 암세포의 수를 대조군(약물 비처리군)과 비교하는 것으로, trypan blue가 살아있는 세포에는 염색되지 않는 점을 이용한 색소 배제법(dye exclusion assay), 살아있는 세포에서 환원된 형태의 51Cr이 산화된 형태로 변화되는 점을 이용하여 세포 용해시 유출되는 51Cr-표지된 단백질(51Cr-labeled protein)을 측정하는 법 등이 과거에는 많이 사용되었으나 시간과 노력이 많이 필요하고 실험조작의 자동화

참고 자료

http://blog.naver.com/zigzagq/100021696543