서강대학교 현대생물학실험3 chromatography를 통한 단백질 분리와 전기영동을 통한 단백질 4차구조 확인

소개

"서강대학교 현대생물학실험3_chromatography를 통한 단백질 분리와 전기영동을 통한 단백질 4차구조 확인"에 대한 내용입니다.

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Materials and Methods
4. Data & Results
5. Discussion
6. References

본문내용

이번 실험에서는 고정상과 이동상의 친화력에 의존해 분리하는 Affinity chromatography와, 분자의 크기에 따라 분리하는 크기배제 크로마토그래피(Size exclusion chromatography), Native PAGE를 통해 eGFP, mCherry, DsRed 형광단백질을 분리, 정제, 전기영동하고 DNA Band를 염색하여 그 이동 경향과 상대적 위치를 관찰하여 단백질의 4차구조를 확인하였다. 단백질은 Monomer의 결합에 따라 1차~4차구조로 구분되며, 4차구조에서의 그 subunit의 개수에 따라 구분할 수 있다. Affinity chromatography에서는 Amicon centrifugal filter tube에서 원심분리를 통해 농축단백질을 토대로 Ni-NTA Resin을 사용하여 그 친화력차이로 세가지의 단백질을 분리하였다. SEC는 Sephadex G-100 Resin을 사용하여 진행하였다. Native PAGE에서는 Chromatography를 통해 분리해 둔 Sample 중 DsRed와 mCherry가 있는 것을 가지고 진행하였으며, 그 결과를 관찰하였다. Affinity chromatography에서는 세가지의 단백질이 뚜렷하게 분리되었고, Size exclusion chromatography에서는 분자량이 큰 Tetramer인 DsRed의 용출 후 Monomer인 mCherry가 나중에 용출된 것을 흡광도 측정에 따른 그래프 양상으로부터 알 수 있었다. Native PAGE에서는 DsRed와 mCherry의 단백질 4차구조에 의한 전기영동 결과를 관찰할 수 있었다. Monomer인 mCherry의 band가 가장 아래까지 먼저 내려갔고, Tetramer인 DsRed는 β-mercaptoethanol을 통해 Disulfide bond가 분리되어 Tetramer와 Dimer가 동시에 관찰되었다. 이번 실험의 Native PAGE 이외에도 단백질의 4차구조를 확인할 수 있는 방법을 알아보았다.

참고자료

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