Abstract
이번 실험에서 효소의 활성을 온도, pH와 기질농도에 따라 알아보기 위해 각각의 조건과 효소 β-galactosidase와 ONPG기질을 사용하여 실험을 진행하였고, Michaelis-Menten 방정식과 Lineweaver-Burk 도면을 사용하여 효소활성 속도인 Vmax와 그에 따른 Km¬값을 식을 통해 도출하였다. 일반적인 효소는 여러가지 요인들에 의해 기질과의 반응에 영향을 받는데, 주된 요인은 온도, pH 혹은 기질의 농도 등이 있다. 보통 37℃, pH 7 근처에서 최대활성을 가지며, 기질의 농도는 증가할수록 일정 부분까지 그 활성이 증가한다. β-galactosidase는 Lac Z에서 발현되는 효소로 ONPG를 분해시켜 알칼리성 용액에서의 ONP로부터 나오는 노란색을 토대로 흡광도를 측정하여 그 활성을 알아볼 수 있다. Michaelis-Menten equation은 효소반응에서의 기질과의 관계를 나타낸 방정식으로 반응 속도를 나타내며, Lineweaver-Burk plot으로 보다 정확한 결과를 알아보았다. 실험결과로 37℃의 온도에서 효소가 가장 큰 활성을 보였으며, pH7.3 근처에서 가장 큰 활성을 보였다. 또한 기질의 농도가 증가함에 따라 효소포화가 일어나기 전까지 효소활성의 증가를 알 수 있었다. Na2CO3가 어떻게 효소반응을 종결시키는지 알아보고, 각 온도, pH, 기질의 농도 조건에 따른 효소반응의 변화 양상을 알아보았다.
Introduction
효소는 생물의 내부 대사를 위한 화학반응 매개 촉매로, 기질(Substrate)와 결합하여 반응을 진행한다. 기질과 결합하면 효소-기질 복합체(Enzyme-substrate complex)를 형성한다. 이는 효소의 Active site에 기질이 붙은 것이다. ES complex를 만들면 생성물(Product)를 만들기 쉬워지는데, 이것은 효소반응이 일어나기 위한 최소한의 장벽에너지인 Activation energy를 낮추는 역할을 한다.
참고자료
· Kenneth W. Raymond, General Organic and Biological Chemistry, 4th edit, New York : John wiley & Sons, 2014, p481.
· Kenneth W. Raymond, General Organic and Biological Chemistry, 4th edit, New York : John wiley & Sons, 2014, p481.
· David L. Nelson, Michael M. Cox, Lehninger’s Principles of biochemistry, W.H. Freeman, 2004, pp.202-203.
· Campbell et al. (2016), Biology, 11th edit., New York : Pearson, p.366.
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