[인천대 생명공학실험1 A+] 동물세포배양, 헤마토사이토미터(hemocytometer) 실험결과 보고서

소개

A+를 쉽게 받을 수 있도록 매우 정리가 잘 되어 있는 대장균, 세포의 생장곡선 실험결과 보고서 입니다.
Human Dermal Fibroblast(섬유아세포), AsPC-1(췌장암세포), DMEM, FBS(Fetal Bovine Serum), PBS, Trypsin, Passage, Haemocytometer, 직접계수법, CO2 incubator에 대한 이론을 포함하고 있습니다.
이론 외에 실험결과와 오차의 원인까지 포함한 고찰 및 결론 또한 체계적으로 꼼꼼히 적혀있습니다.

목차

1. Abstract
2. Information
3. Materials and Methods
4. Result
5. Discussion
6. Conclusion
7. Reference

본문내용

Abstract
이번 실험에서는 AsPC 1 Human Dermal Fibroblast 를 Fetal brovine serum(FBS) 와 culture media(DMEM) 을 이용해 배양관찰 하고 Haemocytometer 로 직접계수법을 사용해 cell count 를 진행했다 PBS, trypsin, 세포의 부착성 으로 passage 를 진행 하고 3 일전 접종한 세포의 상태 (passage 전 ), passage 직후 , passage 한 후 4 일 뒤의 세포의 상태와 모습을 관찰 했 으며 Human Dermal Fibroblast 의 경우 passage 전 , 4 일 뒤 관찰 시 고정된 투명색의 방사형의 세포가 passage 후에는 떠다니는 투명색의 둥그런 형태의 세포가
관찰되었었다 .

<중 략>

동물세포 배양 :먼저 배양된 cell을 현미경을 이용하여 관찰 후 기존에 있던 media를 파스퇴르 파이펫 (유리) 을 suction tube에 꽂아서 흡입하여 제거. PBS buffer 2 mL로 washing을 해주고 넣은 PBS을 제거 후 Trypsin 1 mL 처리한 뒤, 37 ℃ 5 min incubation을 진행.“DMEM+10% FBS” 2 mL 을 넣고 homogeneous cell suspension을 제작 후 100 μL는 counting 용으로 따로 확보하여 cell count를 진행함. 11,800 x g, 5 min간 Centrifuge을 진행. 상층액을 제거 후＂DMEM+10% FBS” 6 mL 을 넣고 pipet으로 homogeneous cell suspension을 제작. 새로운 Petridish 3개에 각 2mL씩 passage를 진행하며 37 ℃ cell culture incubator 로 옮겨 배양 진행.
동물세포 count: 전 단계에서 확보한 100 μL cell suspension 이용하며 10 μL of mixture을 헤마토사이토미터의 각 side에 넣어줌. 10개 corners에서 세포 수를 측정하고(both sides of slide) Total cell number을 계산.

참고자료

· Dean R. et al., 생화학 개념과 응용(2017), 라이프사이언스, p204,205
· L. G. WADE et al., Organic Chemisty eighth edition. 자유아카데미 . p.501
· 이진성 et al., 배양배지의 이해 . 바이오사이언스 . p.121, 122, 342 346