생물화학공학이론및실험 결과 Plasmid DNA isolation from bacterial cell Miniprep

최초 등록일
2018.11.18
최종 저작일
2015.06
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목차

1. Abstract

2. Experiment
1) 시약 및 장치
2) 실험방법

3. Result & Discussion

4. Conclusion

5. Reference

본문내용

이번 실험인 Miniprep의 목적은 미생물에서 Plasmid DNA를 소량 분리하기 위한 실험이었다. 원하는 plasmid DNA를 분리하기 위해서 세포벽과 세포막을 부수고 선형 DNA를 변성시키고 원형 DNA인 Plasmid와 분리하였다. DNA를 분리하는 원리는 선형인 Chromosomal DNA는 pH에 따라 변성이 큰 반면, Plasmid DNA는 변성이 상대적으로 작았다.
실험 과정은 다음과 같다. 세포를 원심분리로 아래로 가라앉혔다. 그다음 S1,2,3 solution으로 세포벽과 세포막을 부수고, Chromosomal DNA를 변성시켜 응집시킨 다음 원심분리하여 찌꺼기를 버렸다. 얻어낸 상등액을 PW로 Washing 하고 필터를 통해서 최종적으로 Plasmid DNA를 얻어내었다.
실험 결과를 알기 위하여 전기영동을 통해 Plasmid DNA의 크기를 알아보고 분리가 잘 되었는지 알아보았다. Plasmid DNA는 초나선형(Supercoiled) Plasmid DNA와 열린 원형(Open-circle) Plasmid DNA가 있는데, 초나선형이 분자의 크기가 작아서 Agarose-gel을 더 쉽게 통과할 것이고, 열린 원형은 하나 혹은 두 개의 가닥에 절단이 있으므로 분자의 크기가 커져서 덜 이동하였다.

참고 자료

T.A.Brown, 『유전자 클로닝과 DNA 분석』, 월드사이언스, p25~p43, (2012).
실험기기 이론과 실제, 김옥진, 문운당, p40~41, (2013).
진단 분자 생물학, 강희규 외 8인(공), 현문사, p122~132, (2006).
분자 생물학 실험서, 김영희, 월드사이언스, p66~p70, (2008).
유전공학의 이해, 남상욱 외 2인(공), , p37~p38, p109~p117, (2013).
“생물화학공학이론및실험” 실험노트
[네이버 지식백과] 도데실황산나트륨 [sodium dodecyl sulfate] (생명과학대 사전, 2008.2.5, 아카데미서적)
[네이버 지식백과] 구아니딘염산 [guanidine hydrochloride] (생명과학대사전, 2008.2.5, 아카데미서적)
[네이버 지식백과] 원심분리기 [centrifugal separator, 遠心分離機] (두산백과)

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