HPLC 비타민분석

최초 등록일
2018.10.04
최종 저작일
2016.09
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HPLC 크로마토그램 반복실험결과 정리
고찰

목차

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크로마토그램과 반복실험결과.(7개조 5물질)

1. Thiamine(Vit. B1)

Thiamine(Vit.B1) 0.1mg/ml
실험차수 RT(min) Area(mVㆍsec)
1 3.12 5027
2 3.12 5043
3 3.12 5010
평균값 3.12 5026
표준편차 값 0.000 16.55
RSD(%) 0.0 0.3

< 중 략 >

고찰
이번 HPLC 실험은 C18 symmetry column을 이용해 비타민 B1, B3, B6, C를 분리, 정제하는 것이다.
각 비타민 분리 정제실험을 반복 실험 한 후 RT(min), Area(mVsec) 평균을 비교 분석해 보았다.
RT값의 순서에 따라 정렬하면
① Ascorbic acid(Vit. C)=2.73, 2.9 RT 평균값으로
비타민 C는 RT 피크가 두 개가 나왔다.
※ 인산이수소칼륨의 수용액의 pH는 4.2~4.7인데 Ascorbic acid의 수용액 pH는 3이다. 따라서 인산이수소칼륨 수용액에서 Ascorbic acid는 변성되어 자신의 기능을 잃고, 만들었던 이동상용액 중 친수성인 methanol에 의해 원래 RT값 보다 앞에서 빠져나와 피크가 두 개 생기는 것이다.

② Thiamine(Vit. B1) = 3.11 RT 평균값으로 두 번째로 나왔다. 그 다음으로
③ Niacine(Vit. B3) = 4.23
④ Pyridoxine(Vit. B6) = 4.51
⑤ Niacine amide(Vit. B3) = 6.41

순서대로 나왔다.

이 실험에 쓰인 C18 symmetry column은 역상컬럼이므로 친수성이 강할수록 빨리나온다. 친수성이 강할수록 RT값이 작아진다는 것이다. 친수성을 나타내는 것중엔 -OH, -COOH, -NH2, -OSO3H, -CO, -SOH 등이 있다.

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없음

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