E.coli의 Transformation

소개글

E.coli의 Transformation에 관한 실험레포트입니다.

목차

1. 실험 목적
2. 실험 이론 및 원리
3. 실험 기구 및 시약
4. 실험 방법
5. 실험 결과
6. 토의 사항
7. 참고 문헌

본문내용

1. 실험 목적
1.1. E.coli의 trasformation 실험을 통해서 유전 공학에 많이 쓰이는 transformation의 기작을 이해하고, 그 방법을 익힌다.

2. 실험 이론 및 원리
2.1. Plasmid
Plasmid는 원형의 double-stranded DNA로 chromosomal DNA와는 분리되어 있다. 플라스미드는 박테리아나 효모 혹은 기생이나 공생 관계로 보다 고등 eukaryotic cell들 안에 존재한다. 이것은 수천 base pair서부터 100 kilo base pair까지의 다양한 크기를 갖는다. 염색체 DNA와 마찬가지로 이 플라스미드 DNA도 분열전마다 복제된다. 세포 분열 동안 적어도 하나 이상의 플라스미드가 딸세포 속으로 들어가게 되며, 이런 성질로 인해 plasmid는 세대를 계속해서 숙주 세포 안에 존재할 수 있게 된다. 많은 자연적으로 존재하는 플라스미드는 공생관계로 숙주 세포에 이익을 제공한다. 예를 들어 어떤 박테리아 플라스미드는 항생제에 대한 저항을 가지고 있어서, 이런 플라스미드를 가지고 있는 박테리아는 항생제가 존재하는 환경 속에서도 생활할 수 있게 된다.
이러한 항생제에 대한 저항성은 박테리아 감염원에 대한 치료에 걸림돌로 작용하고 있다. 항생제가 널리 쓰이게 되면서, 몇 종류의 항생제에 내성을 가진 플라스미드가 진화되어 박테리아에게 다양한 항생제에 대한 내성을 심어주게 되었다. 많은 플라스미드들은 또 한 copy의 플라스미드를 다른 박테리아로 옮기는 단백질을 코딩하는 transfer gene을 가지고 있다. 플라스미드의 이동은 복잡한 고분자 tube인 pilus를 통해 이루어 지는데, 이 pilus는 transfer gene으로 만들어진 몇 종의 단백질로 이루어져 있다.

2.2. Competent Cell
Ligation을 마친 DNA나 circular 형태의 Plasmid를 증폭하기 위해서 혹은 expression하기 위해서 E-coli를 transformation 해야 한다. 이때 사용하는 E-coli host cell을 competent cell이라 부른다.

참고 자료

Molecular Cell Biology, Lodish, Baltimore, Berk, Zipursky, Matsudaira, Darnell, Scientific American Books, NewYork
An introduction to genetic analysis, W.H. Freeman and company, NewYork
Molecular biology of the gene, Watson, Oxford University Press