[일반생물학실험] 대장균 DNA의 추출과 정량

목차

1. 실험 이론 및 원리
2. 실험 기구 및 시약
3. 실험 방법
4. 실험 결과
5. 토의 사항
6. 참고 문헌

본문내용

1. 실험 이론 및 원리
가. 실험 요약
본 실험은 대장균(Escherichia coli)의 DNA(deoxyribonucleic acid)를 추출하고, 겔 전 기영동법(gel electrophoresis)으로 DNA의 추출 여부를 알아보고자 하는 실험이었다. 먼저 Escherichia coli 배양액에서 Escherichia coli를 원심분리하여 얻었다. supernatant를 제거 한 후, Escherichia coli를 EDTA, SDS, NaOH 용액 등으로 세포벽과 단백질 등을 파괴한 다. 그 후 NaCl과 etahnol을 넣어 DNA를 농축시켜 얻는다. 이렇게 얻은 DNA를 RT에서 hydration 시킨 후 gel electrophoresis를 이용해 DNA의 상대적 질량, 양 등을 알아보았 다. 그리고 gel electrophoresis가 끝나면 EtBR 용액으로 DNA를 염색한 후, UV lamp 하 에서 DNA의 추출 여부를 확인해 보았다.

UV lamp 하에서 찍은 사진에서는 DNA와 RNA를 볼 수 있었다. 위쪽에는 DNA가 두 줄 로 관찰되었고, 맨 아래쪽에는 RNA들이 많이 있는 것을 볼 수 있었다. 뒷조의 DNA에는 pEX18T라는 플라스미드(plasmid)를 끼워놓았는데, 이것은 chromosomal DNA보다 크기가 작기 때문에 chromosomal DNA보다 더 아래에 나타났다. 이 사진으로 Escherichia coli의 chromosomal DNA, plasmid, RNA 등의 상대적인 크기는 알 수 있었지만, size marker가 없었기 때문에 정확한 size는 알 수 없었다.

나. 실험 배경
1940년대 중반에 와서야 생화학자들은 DNA와 RNA의 기본적인 화학 구조를 알게되었 다. 생화학자들은 DNA를 각 구성요소로 분해할 경우 DNA는 질소염기(base), 인산 (phosphate), 그리고 디옥시리보스(deoxyribose)로 구성되어 있음을 발견하였다. 이런 이유 로 DNA의 이름은 deoxyribonucleic acid로 명명되었다.

참고자료

· 분자생물학, Weaver, Robert F(2003), 라이프사이언스, p.16～31
· (최신) 분자생물학입문, 이영렬(1999), 한빛지적소유권센터, p.355～359, 379～380