DNA ligation and transformation

목차

1. Introduction
2. Theoretical Background
3. Chemical
4. Procedure
5. Results & discussion
6. Conclusion
7. Reference

본문내용

1. Introduction
DNA ligation, transformation 과정을 진행하여보고 Self-ligation 과정의 결과와 비교하여 반응이 잘 진행되었는지 확인해본다.

2. Theoretical Background
1) Ligase
살아있는 모든 세포는 DNA ligase를 생산하지만 유전 공학에서는 T4 phage에 감염되어 정제된 E.coli.의 효소를 사용한다. T4 phage에 감염될 때 이중가닥 분자 중 한 가닥에서 일어나는 불연속적인 오류를 repairing 해주는 역할을 이 효소가 해준다. 불연속성은 phosphodiester bond와 인접한 nucleotide가 miss되는 위치에서 발생한다. 불연속성이 일어나면 DNA 분자가 파괴될 때 일어나기도 하지만 DNA 복제나 재조합 과정에서도 종종 일어난다. Ligase는 단일 가닥의 불연속성을 고쳐주고, 같은 분자의 양 끝을 이어주는 역할도 수행한다.

2) Transformation-the uptake of DNA by bacterial cells
분자생물학에서, transformation이란 cell에 다른 DNA를 집어넣거나 발현시켜서 유전학적으로 변화시키는 기술을 말한다. Transformation 과정에서 사용하는 DNA는 주로 virus(transduction)나 bacteria에서 cell간의 접촉(conjugation)을 이용하여 얻어진다.
Transformation은 DNA와 RNA transfer 과정에서도 사용되는 용어이다. 예를 들어 형질전환 식물을 만들기 위해서는 다른 형질의 유전정보를 기존의 식물에 삽입하여야 하는데 이 과정에서 DNA를 투입할 때 transformation이 일어난다고 한다. RNA의 경우도 비슷한 과정이 일어나지만 엄격한 기준으로 보면 정확한 transformation은 아니다.
Bacteria transformation은 naked DNA를 이용하여 안정적으로 유전적 변화가 일어나는 것을 의미하고, competence는 환경에서 exogenous DNA를 뽑아올 수 있는 상태를 의미한다.

참고자료

· KAIST laboratory manual
· Biochemistry, 7th edition, Stryer