cloning 레포트

목차

1. 실험 제목
2. 실험 목적
3. 실험 기구 및 시약
4. 실험 방법
5. 실험결과 및 고찰

본문내용

Cloning
gel slice and product preparation
A . Dissolving the gel slice
1. 전기영동 후 gel에 있는 DNA band를 잘라내어 1.5ml microcentrifuge 튜브에 넣는다
2. (10μL Membrane binding solution/10mg gel slice) 정도로 맞춘뒤 gel 조각이 완전히 녹을 때 까지 Vortex하고 50-65℃의 온도에서 놓아둔다.
B. Processing PCR amplification
1. 10μL Membrane binding solution을 PCR amplification에 넣는다.

<중 략>

Transform competent cells, continued
1. ligation 반응물을 포함한 vial을 간단하게 Centrifuge한 후 얼음위에 놓는다.
2. 얼어있던 50μL의 frozen One Shot 형질전환세포를 녹인다.
3. ligation 반응물 2μL를 각각의 형질전환세포 vial에 넣고 pipet tip을 이용하여 부드럽게 섞어준다
4. vial을 얼음위에 30분동안 놓아두면서 남은 ligation 혼합물을 영하 20도에 보관한다

<중 략>

이번 실험의 목적은 cloning을 하면서 이 실험에서 어떻게 우리가 원하는 DNA를 가진 균주를 구별하는 실험이었다. x-gal, IPTG, 임페실린을 이용해 정상적으로 DNA가 재조합된 균주를 찾을 수 있었다. (우리가 체취해온 토양 sample에는 DNA가 없어서 다른 조의 sample을 이용 했다.) 유전자 cloning은 일단 pcr vector를 열처리법 또는 제한효소를 넣어주어 target DNA가 들어갈수 있게 잘라준다. target DNA를 넣어 Recombinant DNA로 만든다.

참고자료

· 없음