High Performance Liquid Chromatography (HPLC)

목차

1. 실험목적
2. 이론
3. 실험방법
4. Reference

본문내용

1. 실험목적
HPLC의 이론 및 기기조작을 통하여 혼합 액상의 성분을 분석하고 크로마토그래피의 원리를 이용하여 시료의 정량·정성 분석 방법을 익힌다.

2. 이론
(1) 크로마토그래피
크로마토그래피는 화합물들을 서로 각각 분리하는 방법으로서 화합물들을 분리관인 컬럼에 통과시키면 어떤 화합물은 다른 것보다 컬럼에 더 오래 머물게 되어 분리된다. 화합물 A와 B를 포함하는 용액을 컬럼위에 주입한다. 컬럼은 미리 고체 입자로 충전되었고 용매로 채워져 있다. 컬럼의 밑이 열려지면 A와 B는 컬럼 아래로 내려오며 새로운 용매를 컬럼위에 넣어 흘려준다. 말일, 용질 A가 B보다 고체입자에 더 강하게 흡착한다면, A는 용액에 더 적은 시간 분율을 보인다. 용질 A는 B보다 더 늦게 컬럼을 내려오게 되어 B 뒤에 나오게 된다.
크로마토 그래피에서 이동상(컬럼을 통해 이동하는 용매)은 액체이거나 기체이다. 정지상(컬럼 안에 고정되어 머물고 있는 물질)은 고체이거나 고체입자 위해 혹은 속빈 모세관 컬럼 안벽에 분배되어 분리된다. 기체크로마토그래피의 이동상은 기체이고, 액체 크로마토그래피의 이동상은 액체이다.
컬럼으로 들어가는 유체를 용리액 이라 하고 나오는 유체를 용출액 이라 부른다. 크로마토그래피 컬럼으로 액체 혹은 기체를 통과시키는 과정을 용리라고 한다.

(2) 머무름 비
예를 들어 25㎝길이의 컬럼에 시료분자(A)를 주입시키고 이동상인 용매(S)로 용리시켰을 때 용매가 컬럼을 지나는 데 걸린 시간은 25초이고 시료가 컬럼을 나오는 데 걸린 평균시간이 100초라면 용매의 속도 U는 1㎝/sec 이며, 시료분자의 평균속도 UA는 0.25㎝/sec이다. 따라서 시료분자는 용매분자보다 이동속도가 1/4밖에 안된다.

참고자료

· 크로마토그래피 / 이대운 지음 / 민음사 / 543.0894 이 222ㅋ
· 분석화학 / 청문각 / 이용근 공역