박테리아 형질전환

소개

이글 분자생물학 실험 글이며, 박테리아의 형질전환에 대해서 나타 내고 있다.

목차

1. 실험제목
2. 실험날짜
3. 실험기구
4. 실험원리
5. 실험방법
6.실험결과
7.고찰

본문내용

1.실험제목: 박테리아의 형질전환
2.실험날짜: 11월 15일 맑음
3.실험기구: 원심분리기, 배양기, 유리비즈, E-tube, 얼음, tube, pipet, plate, LB배지,
heat shock 장치, kanamycine, ampicillin, LB, heat shock 장치
4.실험원리
① 형질전환
박테리아의 형질전환이란 plasmid DNA를 세포 내로 넣어주는 작업을 말한다. 형질전환은 거의 모든 cloning과정에 필수적이므로 가능한 한 효율적인 방법을 찾는 것이 중요하다. Large DNA는 small DNA보다 형질전환 효율이 떨어지며 DNA의 양이 너무 많아도 좋지 않으므로, 같은 competent cell을 사용하더라도 적당한 길이와 적당한 양의 DNA를 사용하는 것이 중요한 요소이다.

② color selection
LacZ 유전자를 이용한 color selection을 하는 경우, 배지에 isopropylthio-β-D-galactosi
de(IPTG)와 X-gal을 첨가해주어야 한다.X-gal(50 mg/ml) 20~40 μl와 IPTG(839 mM) 5~10μl
를 미세원침관에서 섞어 배지위에 떨어뜨리고 밀대로 골고루 펴주면 되는데, 37°C에 적어도 10분 두었다가 박테리아를 도말하도록 한다. X-gal은 50 mg/ml의 농도로 dimethylformamide
(DMF)에 녹여 빛이 차단된 용기에 담아 -20°C에 보관하고, IPTG는 2g을 증류수에 녹여 10ml 까지 채운다음 0.22 μm-filter하여 1 ml씩 나누어 보관한다.

참고자료

· 없음