면역 조직 화학적 염색방법

소개

면역학 실험 A+ 자료입니다.

목차

1.서론

2.검체준비방법

3.염색법 방법의 차이에 따른 차이점(PAP, ABC)

4.일차, 이차 항체 사용농도조절에 따른 결과차이

5.발색체의 종류와 해석상 차이, 장단점

6.판독시의 문제점

7.면역염색의 장, 단점

8.연구 경비와 필요장비

9.참고문헌

본문내용

질병의 정확한 진단과 적절한 치료 그리고 이에 대한 연구를 위해서는 병소에서 채취한 검체의 형태학적 소견을 관찰하는 것이 중요하다. 이러한 형태학적 변화를 관찰하기 위해서, 연구자들은 생검조직으로 제작한 헤마톡실린-에오신 염색표본을 이용하고 있으며, 필요한 경우에는 세포의 미세구조를 관찰하기 위하여 전자현미경 검색을 시행하고 있다. 그러나, 각종질환은 점차 세분화되고, 새로운 진단기준이 소개되고 있으며, 종양의 진단에 도움을 주는 종양표지자, 그리고, 예후를 판정할 수 있는 예후인자들이 알려지고 있어서, 통상적인 헤마톡실린-에오신 염색표본이나 전자현미경 검색만으로는 이러한 종합적인 정보를 얻기가 어렵다. 이러한 문제점들을 보완해 주는 검사방법인 면역조직화학적 염색은 미분화 세포의 기원을 확인해주거나, 효소, 호르몬, 종양표지자 및 예후인자의 존재 유무, 암종과 육종의 구별 및 양성종양과 악성종양의 감별, 그리고 전이암의 원발소를 추정하는데 효율적으로 이용되고 있다.1) 면역조직화학적 염색은 민감성과 특이성이 매우 높은 검사법으로서 최근 20년 사이에 진단병리학과 형태학적 연구 등에 필수적인 검사법으로 이용되고 있고,2) antigen retrieval (AR)법이 도입되면서 획기적인 발전을 이루게 되었다.3)


가. 검체준비방법 : 고정방법에 따른 결과 차이
면역조직화학적 염색에 이용될 수 있는 검체는 냉동 조직절편, 파라핀 절편, 세포도말 표본 등이며, 이중에서 파라핀 절편이 가장 많이 이용되고 있다. 세포나 조직의 형태학적 관찰을 원활하게 하기 위해서는 검체의 고정 과정이 제일 중요하다. 고정이 잘된 조직은 세포의 소기관이 잘 유지되지만, 고정이 부족하면 형태학적 구조가 불완전하게 되고, 고정이 너무 지나치면 항원의 소실과 비특이적인 반응이 나타날 수 있다.4.5) 이상적인 고정은 세포내 소기관의 형태가 완전히 유지되면서 항원성을 잃지 않는 것인데 이 두가지를 모두 만족시키기는 쉽지 않다. 조직 고정제는 응고형 고정제와 비응고형(변성형) 고정제로 구분되며 값이 저렴하고 통상적으로 가장 많이 사용되고 있는 포르말린은 비응고형 고정제에 해당된다. 포르말린은 1시간에 1 mm 정도 조직에 침투하면서 고정이 이루어지는데, 항원결정부위(epitope)의 파괴가 적고 단백질과 펩타이드를 교차결합시키므로 세포의 형태가 잘 유지된다.

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